本試劑盒只能用于科學研究，不得用于醫(yī)學診斷。
【人上皮型鈣粘蛋白（E-cad）Elisa試劑盒試劑盒用途】
定量檢測人血清、血漿及相關(guān)液體樣本中上皮型鈣粘蛋白（E-cad）的含量。
【人上皮型鈣粘蛋白（E-cad）Elisa試劑盒檢測原理】
本試劑盒采用雙抗體兩步夾心酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）。將標準品、待測樣本加入到預(yù)先包被人上皮型鈣粘蛋白（E-cad）單克隆抗體透明酶標包被板中，溫育足夠時間后，洗滌除去未結(jié)合的成分，再加入酶標工作液，溫育足夠時間后，洗滌除去未結(jié)合的成分。依次加入底物A、B，底物（TMB）在辣根過氧化物酶（HRP）催化下轉(zhuǎn)化為藍色產(chǎn)物，在酸的作用下變成黃色，顏色的深淺與樣品中人上皮型鈣粘蛋白（E-cad）濃度呈正相關(guān)，450nm波長下測定OD值，根據(jù)標準品和樣品的OD值，計算樣本中人上皮型鈣粘蛋白（E-cad）含量。
【人上皮型鈣粘蛋白（E-cad）Elisa試劑盒試劑盒組成】
1
酶標包被板
12孔×8條
7
顯色劑A液
6mL

2
標準品
0.3mL×6管
8
顯色劑B液
6mL

3
20倍濃縮洗滌液
25mL
9
終止液
6mL

4
樣本稀釋液
6mL
10
說明書
1份

5
特殊稀釋液
6mL
11
封板膜
2張

6
酶標試劑
6mL
12
密封袋
1個
 

備注：標準品（1號→6號）濃度依次為：320、160、80、40、20、10 ng/L.
【需要而未提供的試劑和器材】
1、37℃恒溫箱
2、標準規(guī)格酶標儀
3、精密移液器及一次性吸頭
4、蒸餾水
5、一次性試管
6、吸水紙
【操作步驟】
1、準備：從冰箱取出試劑盒，室溫復(fù)溫平衡30分鐘。
2、配液：用蒸餾水將20倍濃縮洗滌液稀釋成原倍的洗滌液。
3、加標準品和待測樣本：取足夠數(shù)量的酶標包被板，固定于框架上，分別設(shè)置標準品孔、待測樣本孔和空白對照孔，記錄各孔位置，在標準品孔中加入標準品50μL；待測樣本孔中先加入待測樣本10μL，再加樣本稀釋液40μL（即樣本稀釋5倍）；空白對照孔不加。
4、溫育：37℃水浴鍋或恒溫箱溫育30min。
5、洗板：棄去液體，吸水紙上拍干，每孔加滿洗滌液，靜置1min，甩去洗滌液，吸水紙上拍干，如此重復(fù)洗板4次（也可用洗板機按說明書操作洗板）。
6、加酶標工作液：每孔加入酶標工作液50μL，空白對照孔不加。
7、溫育：37℃水浴鍋或恒溫箱溫育30min。
8、洗板：棄去液體，吸水紙上拍干，每孔加滿洗滌液，靜置1min，甩去洗滌液，吸水紙上拍干，如此重復(fù)洗板4次（也可用洗板機按說明書操作洗板）。
9、顯色：每孔先加入顯色劑A 液50μL，再加入顯色劑B液 50μL，平板混勻器混勻30s（或用手輕輕震蕩混勻30s），37℃避光顯色15min。
10、終止：取出酶標板，每孔加終止液50μL，終止反應(yīng)（顏色由藍色立轉(zhuǎn)黃色）。
11、測定：以空白孔調(diào)零，在終止后15分鐘內(nèi)，用450nm波長測量各孔的吸光值（OD值）。
12、計算：根據(jù)標準品的濃度及對應(yīng)的OD值，計算出標準曲線的直線回歸方程，再根據(jù)樣本的OD值，在回歸方程上計算出對應(yīng)的樣品濃度，也可以使用各種應(yīng)用軟件來計算。zui終濃度為實際測定濃度乘以稀釋倍數(shù)。