生物素標(biāo)記試劑的合成方法改進(jìn)及其在DNA合成中的應(yīng)用
近年來，核酸探針雜交技術(shù)在醫(yī)療科研和臨床中被廣泛采用，成為一項(xiàng)直接檢查病原體、癌基因、
遺傳病基因突變等的重要手段。用于雜交的核酸探針必須先進(jìn)行標(biāo)記，可分為同位素標(biāo)記和非同位
素標(biāo)記兩大類。生物素標(biāo)記的核酸探針屬于非同位素標(biāo)記，它是利用親和素對生物素有*親和力
的原理，分子雜交后用親和素或鏈霉親和素進(jìn)行檢測［1～4］。生物素標(biāo)記探針穩(wěn)定，不失活，并
能配用多種檢測系統(tǒng)，簡單方便。
Richard T Pon［5］設(shè)計(jì)合成了一種較為理想的生物素標(biāo)記試劑———［1-N-（4，4’-二甲氧
基三苯甲基）-生物素-6-氨基己基］-2-氰乙氧基-N，N-二異丙基亞磷酰胺（3）。3所含的6-氨基己基
側(cè)鏈顯著增加了生物敏感性［6］，同時3中的二甲氧三苯基增加了穩(wěn)定性，不僅有利于寡核苷酸鏈
的合成與純化，而且還可以在DNA合成儀上通過顏色變化檢測連接效率。
為了推進(jìn)3的應(yīng)用，本文改進(jìn)文獻(xiàn)［5］方法，先將生物素與DMTrCl（4，4’-二甲氧基三苯基氯
甲烷）反應(yīng)制得1-N-（4，4’-二甲氧基三苯甲基）生物素（1）;1與6-氨基-1-己醇在中縮合
制得1-N-（4，4’-二甲氧基三苯甲基）生物素-6-氨基己醇（2）;2與磷試劑2-氰乙氧基-雙（N，N-二異
丙基）亞磷酰胺（Ⅰ）［7］反應(yīng)合成了3（Scheme1），總收率51．0%，其結(jié)構(gòu)經(jīng)1H NMR，13 C NMR，
31P NMR和MS確證。
生物素標(biāo)記試劑的合成方法改進(jìn)及其在DNA合成中的應(yīng)用