細(xì)菌實(shí)驗(yàn)蛋白質(zhì)提取純化技術(shù)介紹

實(shí)驗(yàn)試劑
采用T7• Tag Affinity Purification Kit
T7•Tag抗體瓊脂。B/W緩沖液：4.29mM Na2HPO4，1.47 mM KH2PO4，2.7 mM KCl， 0.137mM NaCl，1%吐溫-20，pH7.3 洗脫緩沖液: 0.1M檸檬酸，pH2.2. 中和緩沖液：2M Tris，pH10.4。 PEG 20000。

實(shí)驗(yàn)步驟
1.100ml 含重組表達(dá)質(zhì)粒的菌體誘導(dǎo)后，離心5000g×5min，棄上清，收獲菌體，用10ml預(yù)冷的B/W緩沖液重懸。
2. 重懸液于冰上超聲處理，直至樣品不再粘稠，4℃離心 14000g×30min，取上清液，0.45μm膜抽濾后作為樣品液。
3. 將結(jié)合T7•Tag抗體的瓊脂充分懸起，平衡至室溫，裝入層析柱中。
4. B/W緩沖液平衡后樣品液過柱。
5. 10ml B/W緩沖液過柱，洗去未結(jié)合蛋白。
6. 用5ml洗脫緩沖液過柱，每次1ml，洗脫液用含150μl中和緩沖液的離心管收集，混勻后置于冰上，直接SDS-PAGE分析。
7. 將洗脫下來的蛋白放入透析袋中，雙蒸水透析24hr，中間換液數(shù)次。
8. 用PEG 20000濃縮蛋白。

注意事項(xiàng)
蛋白在過層析柱前，要0.45μm膜抽濾，否則幾次純化后，柱子中會(huì)有不溶物。

魚肝細(xì)胞生長(zhǎng)因子(HGF)ELISA Kit    ，英文名：    Fish hepatocyte growth factor,HGF ELISA Kit    ，規(guī)格：    48T/96T
魚鈣調(diào)磷酸酶(CaN)ELISA Kit    ，英文名：    Fish Calcineurin,CaN ELISA Kit    ，規(guī)格：    48T/96T
魚酚氧化酶(PO)ELISA Kit    ，英文名：    Fish phenol oxidase,PO ELISA Kit    ，規(guī)格：    48T/96T
魚多巴銨(DA)ELISA Kit    ，英文名：    Fish dopamine,DA ELISA kit    ，規(guī)格：    48T/96T
魚膽囊收縮素/腸促胰酶肽(CCK)ELISA Kit    ，英文名：    Fish Cholecystokinin,CCK ELISA Kit    ，規(guī)格：    48T/96T
魚催乳素(PRL/LTH)ELISA Kit    ，英文名：    Fish Prolactin/Luteotropic Hormone,PRL/LTH ELISA Kit    ，規(guī)格：    48T/96T
魚促腎上腺皮質(zhì)激素(ACTH)ELISA Kit    ，英文名：    Fish adrenocorticotropic hormone,ACTH ELISA kit    ，規(guī)格：    48T/96T
魚促甲狀腺素(TSH)ELISA Kit    ，英文名：    Fish thyroid stimulating hormone,TSH ELISA Kit    ，規(guī)格：    48T/96T