細(xì)胞培養(yǎng)基和器材如何保證無菌及防止污染的過濾藥品

    由于一些微生物，如支原體，病毒等能通過濾膜，所以過濾藥品仍潛在被外源微生物污染的危險(xiǎn)，近年來，60Co輻射滅菌技術(shù)在醫(yī)藥、食品等領(lǐng)域廣泛應(yīng)用，由于輻射滅菌能夠*殺滅所有微生物。有試驗(yàn)證實(shí)以2Mrad輻射處理的各培養(yǎng)基樣品達(dá)到了無菌要求，經(jīng)多批培養(yǎng)試驗(yàn)，輻射滅菌安全可靠；輻射滅菌的培養(yǎng)基營(yíng)養(yǎng)性能不低于過濾組，證明輻射滅菌對(duì)培養(yǎng)基性能無不良影響；對(duì)血清的輻射滅菌試驗(yàn)效果也表明60COγ射線不影響培養(yǎng)效果。把干粉培養(yǎng)基經(jīng)無菌操做定量分裝于滅菌容器內(nèi)，輻射后以干粉原型貯藏，不但蛋白胨的純凈性得到保障，而且營(yíng)養(yǎng)性能較過濾后以水溶液形式保存更穩(wěn)定，對(duì)谷氨酰胺等這類水溶液不穩(wěn)定者特別合適。

    組織細(xì)胞培養(yǎng)工作中，可以從以下幾方面來預(yù)防支原體的污染：控制環(huán)境污染；嚴(yán)格實(shí)驗(yàn)操作；細(xì)胞培養(yǎng)基和器材要保證無菌；在細(xì)胞培養(yǎng)基沖加入適量的抗生素。

　　抗生素主要用于消毒培養(yǎng)液，是培養(yǎng)基過程中預(yù)防微生物污染的重要手段，也是微生物污染不嚴(yán)重時(shí)的“急救”方法。不同抗生素殺滅微生物不同，應(yīng)根據(jù)需要選擇。

　　在細(xì)胞培養(yǎng)過程中如果發(fā)現(xiàn)破碎的細(xì)胞甚多，培養(yǎng)細(xì)胞需要頻繁改善營(yíng)養(yǎng)環(huán)境才能支持長(zhǎng)期傳代培養(yǎng)時(shí)，應(yīng)該懷疑支原體污染。支原體污染難以觀察特殊的外觀變化，培養(yǎng)液也不渾濁。

　　培養(yǎng)基支原體污染細(xì)胞后，特別是重要的細(xì)胞株，有必要清除支原體，常用方法有：抗生素處理、抗血清處理、抗生素加抗血清和補(bǔ)體聯(lián)合處理。要注意的是：支原體沒有細(xì)胞壁，故作用于細(xì)胞壁生物合成的抗生素，如內(nèi)酰胺類、萬古霉素等是不敏感的；對(duì)多粘菌素、利福平、磺胺藥物普遍耐火要。對(duì)支原體zui有抑制活性抗生素是四環(huán)素類、大環(huán)內(nèi)酯類等，氨基糖苷類、氯霉素對(duì)支原體有較小的抑制作用。必要時(shí)更換所有培養(yǎng)用物。通常，濾過除菌的方法對(duì)支原體是沒有作用的。