研生試劑-細(xì)胞因子受體檢測(cè)的基本技術(shù)

1．活細(xì)胞吸收試驗(yàn)  將過(guò)量的待測(cè)細(xì)胞與*細(xì)胞因子(配基)共孵育，若細(xì)胞膜表面存在相應(yīng)的受體即可吸收配基，通過(guò)測(cè)定回收后配基生物活性的喪失情況可確定受體是否存在。此法簡(jiǎn)便，適用于定性，但不適用于定量檢測(cè)。

    2．核素標(biāo)記重組配基的放射受體分析

    這是確定細(xì)胞受體分布及其特性的主要方法，可測(cè)定受體的數(shù)量及親和力。一般采用：①重組細(xì)胞因子體外標(biāo)記核素；②利用cDNA轉(zhuǎn)錄獲得足夠量的細(xì)胞因子mRNA，注入非洲爪蟾卵母細(xì)胞內(nèi)，在體外翻譯的底物中加入核素標(biāo)記的氨基酸(如³⁵S-Met或3H-Leu等)。通過(guò)生物合成內(nèi)標(biāo)記產(chǎn)生的重組細(xì)胞因子的功能不受影響，因此適用于某些穩(wěn)定性較差的細(xì)胞因子的檢測(cè)。

    3．抗受體McAb法  利用McAb既可通過(guò)封閉受體抑制相應(yīng)細(xì)胞因子的生物學(xué)活性進(jìn)行受體檢測(cè)，也可用標(biāo)記的McAb直接作免疫放射受體分析或免疫沉淀。

    4．重組細(xì)胞因子與受體的交聯(lián)分析

    利用化學(xué)交聯(lián)劑將標(biāo)記的重組細(xì)胞因子與膜受體交聯(lián)，細(xì)胞裂解物經(jīng)PAGE后進(jìn)行放射自顯影分析，通過(guò)帶型分析可確定受體的分子量及亞單位。

    5．受體cDNA分析  分子克隆是在基因水平上研究細(xì)胞因子受體的*途徑，通過(guò)核苷酸序列推導(dǎo)的氨基酸順序進(jìn)行結(jié)構(gòu)功能區(qū)分析，是深入探討受體作用機(jī)制的基礎(chǔ)。受體cDNA片段可用來(lái)制作cDNA探針以研究受體基因的轉(zhuǎn)錄功能及表達(dá)調(diào)控。此外還可利用基因工程技術(shù)重組受體分子。目前已有10多種細(xì)胞因子受體的基因被克隆出來(lái)，包括IL-1R，IL-2Ra，IL-2即，IL-3R，IL-4R，IL-6R，IL-7R，INF/R，MPOR，M-CSFR等。

    6．可溶性細(xì)胞因子受體的檢測(cè)  某些細(xì)胞因子受體除存在于細(xì)胞膜外，尚可分泌進(jìn)入體液，稱為可溶性細(xì)胞因子受體(solublecytokinereceptor)，如slL-2R，slL-4R和slFN-yR。這類受體多采用免疫學(xué)方法檢測(cè)。下面以IL-2R為例介紹細(xì)胞因子受體的檢測(cè)方法，這些方法也適用于其他細(xì)胞因子受體的檢測(cè)。