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柱式血液DNAout
產(chǎn)品及特點
本產(chǎn)品是基于離心柱/硅膠膜原理的、專門用于從新鮮或冷凍的動物(包括人
和禽類)抗凝全血中提取基因組DNA的試劑。它具有下列特點:
1. DNA純凈,OD260/280在1.8-2.0之間。不含蛋白質(zhì)和RNA污染,可直
接用于PCR、酶切、雜交等。
2. 產(chǎn)量高,一般為1-10 ug/mL全血(對哺乳動物血液)。
3. 操作簡單,整個過程約20分鐘,全室溫操作,適合大規(guī)模樣品處理。
4. 用量廣泛, 每次可以處理少達(dá)20 uL(對禽類動物血液), 多達(dá)1 mL的血
液(對哺乳動物血液)。
5. 安全無毒,本試劑盒對人體無毒,無腐蝕性和刺激性氣味。
規(guī)格及成分
成 份
50次包裝
(60306-50)
溶液A 25mL
溶液B 25 mL
離心吸附柱 50套
通用洗柱液 50mL
通用洗脫液 5 mL
使用手冊 1份
運輸及保存 常溫運輸、4℃保存,有效期一年
自備試劑 無
使用方法
1. 在0.02-1 mL新鮮或抗凝血液(冷凍血需先37℃水浴融化)中加入0.5 mL
溶液A,吹打混勻。
a) 哺乳動物,血液使用量以300 uL以下為宜,使用量越大產(chǎn)量越高,但
產(chǎn)率會降低。如果血液多于300 uL,重復(fù)1-2步兩次可以提高產(chǎn)率。
b) 禽類動物,血液使用量以20 uL以下為宜,可以從第3步做起。
2. 室溫12,000-15,000 rpm離心2分鐘,沉淀呈粉紅色,小心傾去上清。
3. 再短暫離心半分鐘,吸棄殘留的液體。此步有利于后面的細(xì)胞裂解,但一般
可以省略。
4. 向有沉淀的離心管內(nèi)加入0.5 mL溶液B(溶液B有少量晶體沉淀,用前需
要搖晃均勻),用移液槍吹打使沉淀充分懸浮起來。此步目的是裂解細(xì)胞,釋
放DNA,所以吹打越充分越好。
5. 靜置2分鐘待溶液變清亮后,將液體轉(zhuǎn)移到離心吸附柱中并靜置2-5分鐘,
以使DNA與膜充分結(jié)合。
6. 12,000 rpm離心半分鐘,DNA將吸附到膜上,棄收集管中的廢液。
7. 加入0.7 mL的通用洗柱液,12,000 rpm離心半分鐘,棄收集管中的廢液。
8. 加入0.3 mL的通用洗柱液,12,000 rpm離心半分鐘,棄收集管中的廢液。
9. 12,000 rpm離心半分鐘,甩干殘留液體。此步很重要,以去除膜上殘留通
用洗柱液,否則會影響后續(xù)反應(yīng)。
10. 將離心吸附柱置于一新的1.5 mL塑料離心管(自備)中,加入適量50 uL
通用洗脫液,室溫放置2分鐘。如果將通用洗脫液在65℃預(yù)熱后再使用,洗
脫DNA的效果會更好。
11. 12,000 rpm離心半分鐘,離心管底溶液即DNA溶液??梢粤⒓词褂没蚍?br />冰箱長期保存。
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