小麥源性成分探針法熒光定量PCR試劑盒通用原則:

1, 先選擇好探針,然后設計引物使其盡可能的靠近于探針。

2, 擴增子的長度應不超過400bp,理想的*能在100-150bp內,擴增片斷約短,有效的擴增反應就越容易獲得。較短的擴增片斷也容易保證分析的一致性

3, 保持GC含量在20%和80%之間,GC富含區(qū)容易產生非特異反應,從而會導致擴增效率的降低,及在SG分析中非特異信號。

4, 為了保證效率和重復性,應避免重復的核苷酸序列,尤其是G(不能有4個連續(xù)的G)

5, 將引物和探針互相進行配對檢測,以避免二聚體和發(fā)卡結構的形成。

b),探針設計指導

1,在設計引物之前設計探針

2,探針的Tm值應在68-70℃之間,如果是目測探針,則要仔細審查GC富含區(qū)。

3,探針的5’端要避免有鳥an酸,5’G會有淬滅作用,即使被切割下來這種淬滅作用也還會存在

4,選擇C多于G的鏈作探針,G的含量多于C會降低反應效率,這時就應選擇配對的另一條鏈作為探針。

6, 探針應盡可能的短,不要超過30個bp。

7, 檢測探針的DNA折疊和二級結構。

MLF, 小鼠淋巴成纖維細胞

mRTEC, 小鼠腎小管上皮細胞

CSC, 小鼠心肌細胞

小鼠骨髓間充質干細胞（BMSCs）

MEF, 小鼠胚胎成纖維細胞

MM, 小鼠小膠質細胞

mCF, 小鼠心臟成纖維細胞

MN-c, 小鼠皮質神經元

 細胞名稱

人絨毛膜毛細血管內皮細胞

人羊膜上皮細胞

人絨毛間充質成纖維細胞

人羊膜間充質基質細胞

人絨毛膜間充質基質細胞

NRK-52E，大鼠腎細胞

H9c2大鼠心肌細胞（ATCC來源）

C2C12, 小鼠肌原細胞

NIH/3T3, 小鼠成纖維細胞系

大鼠骨髓間充質干細胞（BMSCs）

HSC-T6, 大鼠肝星狀細胞系

CHO, 中國倉鼠卵巢細胞系

COS-7L, 非洲綠猴腎成纖維細胞

SF9, 昆蟲卵巢細胞

BRL 3A, 大鼠肝正常細胞

HK-2, 人腎皮質近曲小管上皮細胞

HET-1A, 人食管上皮細胞