人轉(zhuǎn)錄因子AP-1試劑盒準(zhǔn)備試劑與收集血樣:
1. 收集標(biāo)本:血清、血漿(EDTA )、細(xì)胞培養(yǎng)上清液、組織勻漿等盡早檢測, 2-8 ℃ 保存48 小時;更長時間須冷凍( -20 ℃或 -70 ℃ )保存,避免反復(fù)凍融。
2. 標(biāo)準(zhǔn)品液配制:使用前加入0.5ml 蒸餾水 混勻,配成 400 0 p g/ml 的溶液 。 設(shè)標(biāo)準(zhǔn) 管 8 管, 每 管加入標(biāo)本稀釋液 20 0ul 。在第一管中加入 400 0 p g/ml 的標(biāo)準(zhǔn)品溶液 2 00ul 混勻后用加樣器吸出 2 00ul ,移至第二 管 。如此反復(fù)作對倍稀釋,從第七 管 中吸出 2 00ul 棄去。第八 管 為空白對照。
3. 10× 標(biāo)本稀釋液用蒸餾水作 1: 1 0 倍稀釋( 示例: 1ml濃稀釋液 +9ml 蒸餾水)。
4. 洗滌液:用重蒸水 1:20 稀釋(示例:1ml 濃縮洗滌液加入 19ml 的重蒸水)
結(jié)果計(jì)算與判斷
1. 所有 OD 值都應(yīng)減除空白值后再行計(jì)算。
2. 以標(biāo)準(zhǔn)品20 00 、100 0 、500 、 250 、 125 、 62.5 、 31.2 、 0 pg /ml 為橫坐標(biāo), OD 值為縱坐標(biāo),在坐標(biāo)紙上作圖,畫出標(biāo)準(zhǔn)曲線。
3. 根據(jù)樣品 OD 值在該曲線圖上查出相應(yīng) E2F1 含量 ,再乘上稀釋倍數(shù)即可 。
試劑盒性能
1. 靈敏度 : 最小的E2F1 檢測濃度小于 15 pg/ml。
2. 特異性: 可同時檢測重組或天然的人 E2F1 。 不與 人其它細(xì)胞因子有交叉反應(yīng)。
3. 重復(fù)性:板內(nèi)、板見變異系數(shù)均小于8.9%。
人胚胎,皮膚,肌肉;M-20
人胚胎,皮膚,肌肉;M-22
人正常前列腺上皮細(xì)胞;RWPE-1
人羊膜細(xì)胞;WISH
人胚肺成纖維細(xì)胞;MRC-5
人胚胎肺成纖維細(xì)胞;WI-38
人胚腎細(xì)胞;293 [HEK-293]
人淋巴細(xì)胞;1301
人胚肺二倍體細(xì)胞;KMB-17
人胚肺成纖維細(xì)胞;WI-38 [WI38]
人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞(人膀胱癌細(xì)胞污染);ECV-304 [ECV304;ECV 304]
人胚肺成纖維細(xì)胞;MRC-5
人羊膜細(xì)胞;WISH
人正常肝細(xì)胞;L-02
人胚肺細(xì)胞VA13細(xì)胞;WI-38 VA13亞系2RA
人胚肺二倍體細(xì)胞;HL
人腎皮質(zhì)近曲小管上皮細(xì)胞;HK-2
人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞;HUV-EC-C