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NADP磷酸酶(NADPase)操作步驟

時間:2021/7/7閱讀:431
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NADP磷酸酶(NADPase)操作步驟:
1.標準品的稀釋與加樣:在酶標包被板上設標準品孔10孔,在第一、第二孔中分別加標準品100μl,然后在第一、第二孔中加標準品稀釋液50μl,混勻;然后從第一孔、第二孔中各取100μl分別加到第三孔和第四孔,再在第三、第四孔分別加標準品稀釋液50μl,混勻;然后在第三孔和第四孔中先各取50μl棄掉,再各取50μl分別加到第五、第六孔中,再在第五、第六孔中分別加標準品稀釋液50ul,混勻;混勻后從第五、第六孔中各取50μl分別加到第七、第八孔中,再在第七、第八孔中分別加標準品稀釋液50μl,混勻后從第七、第八孔中分別取50μl加到第九、第十孔中,再在第九第十孔分別加標準品稀釋液50μl,混勻后從第九第十孔中各取50μl棄掉。
2.加樣:分別設空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑,其余各步操作相同)、待測樣品孔。在酶標包被板上待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,然后再加待測樣品10μl(樣品最終稀釋度為5倍)。加樣將樣品加于酶標板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻。
3.溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。
4.配液:將30(48T的20倍)倍濃縮洗滌液用蒸餾水30(48T的20倍)倍稀釋后備用。
5.洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,如此重復5次,拍干。6.加酶:每孔加入酶標試劑50μl,空白孔除外。
7.溫育:操作同3。
8.洗滌:操作同5。
9.顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色15分鐘.
10.終止:每孔加終止液50μl,終止反應(此時藍色立轉黃色)。
11.測定:以空白空調零,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值)。 測定應在加終止液后15分鐘以內進行。

 

4-Methylumbelliferone 5g/10g/25g/100g原裝
(4-甲基傘形酮)
5-Bromo-2'-Deoxyuridine 250mg/1g
(5-溴-2-脫氧尿苷)
6-(γ,γ-Dimethylallylamino) 25mg 原裝
purineriboside(嘌呤核苷)
6-BenzylAminopurine 1g/5g /25g 原裝
(6-芐氨基嘌呤(6-BA))
6-CarboxyfluoresceinDiacetate 10mg/25mg/100mg原裝
(6-羧基二乙酸螢光素)
6-FurfurylAminopurine 250mg/1g原裝
(6-呋喃氨基嘌呤(激動素))
8-Azaguanine 1vial/1vial*5
(8-氮鳥嘌呤)
8-Hydroxyquinoline 10g/25g/100g/500g原裝
(8-羥基喹啉)
a-Amylase 100mg/1g 原裝
(a-淀粉酶)
a-Amylase 500g
(a-淀粉酶)
Abscisicacid 25mg/50mg/250mg原裝
(ABA)
(脫落酸)
ACES 10g/25g/100g
Acetosyringone 1g/5g/25g原裝
(乙酰丁香酮)

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