對(duì)蝦桃拉病毒(TSV)熒光PCR檢測(cè)試劑盒實(shí)驗(yàn)操作
1.模板制備(樣本制備區(qū))
建議使用配套水生動(dòng)物病毒基因組DNA/RNA提取試劑盒系列產(chǎn)品,具體過程詳見產(chǎn)品說明書。
2.添加模板(模板添加區(qū),放置于冰盒上進(jìn)行)
剪下所需測(cè)試數(shù)的已含有反應(yīng)液的PCR管,放置在室溫待解凍后,離心30秒后揭開封口膜,向每管反應(yīng)液中分別加入5μL模板,順序?yàn)镹G、待測(cè)樣品模板、PG-TSV-P。蓋好配套的PCR管蓋后,渦旋混勻30s,離心1min,立即進(jìn)行PCR擴(kuò)增反應(yīng)。
3. 擴(kuò)增反應(yīng)(擴(kuò)增及產(chǎn)物分析區(qū))
使用熒光定量PCR儀,熒光基團(tuán)選擇FAM,淬滅基團(tuán)選擇TAMRA。
結(jié)果分析判定
1 結(jié)果分析條件設(shè)定
設(shè)置 Baseline 和 Threshold:一般直接按機(jī)器自動(dòng)分析的結(jié)果分析,當(dāng)曲線出現(xiàn)整體傾斜時(shí),根據(jù)分析后圖像調(diào)節(jié) Baseline 的start 值(一般可在 3~15 范圍內(nèi)調(diào)節(jié))、
stop 值(一般可在 5~20 范圍內(nèi)調(diào)節(jié)),以及 Threshold 的 Value 值(上下拖動(dòng)閾值線至高于陰性對(duì)照),重新分析結(jié)果。