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小鼠ELISA試劑盒自問世以來,以其敏感性高,特異性強(qiáng),操作簡便、安全,開創(chuàng)了免疫學(xué)診斷的新世紀(jì)在臨床診斷方面得到了廣泛的應(yīng)用。但是ELISA試劑在它的研究、及使用中常常會碰到非特異性顯色問題,ELISA試劑盒特異性、檢驗標(biāo)本中含酶標(biāo)記物的干擾物,操作不當(dāng)?shù)纫蛩囟紩?dǎo)致這樣的結(jié)果。本文就在實驗過程中產(chǎn)生的一些原因及如何采取一些措施,消除非特異性顯色作以分析。
1、試劑盒特異性因素
1、1 固相載體的選擇
ELISA中常用的固相載體有微量滴定板、小珠和小試管三種,以微量滴定板zui為常見。它具有良好的吸附性能,孔底透明度高,空白值低,各板之間、同一板各孔之間性能相近。聚苯乙烯ELISA板由于原料的不同和制作工藝的差別,各產(chǎn)品的質(zhì)量差異很大。因此,在選擇ELISA試劑盒同時要對其使用的微孔板型號進(jìn)行認(rèn)證,評估。
1、2包被物的純度
在酶聯(lián)免疫測定尤其是間接ELISA中,試劑的特異性取決于使用抗原的純度。目前由于技術(shù)條件的限制,包被用抗原或抗體的純度不可能達(dá)到100%,所以有些非特異性顯色不可避免,ELISA試劑盒只能盡可能提高純度,提高特異性。目前使用的包被抗原一般為合成多肽抗原。
1、3包被抗體的效價
具有高親和力和高特異性的包被抗體,是決定試劑特異性的重要方面。
1、4 封閉
是ELISA中重要的一步,目的是封閉固相載體表面尚未被所占據(jù)的空隙,減少后續(xù)步驟中非特異性蛋白的干擾。
2、檢驗標(biāo)本中含有酶標(biāo)記物的干擾物
2、1內(nèi)源性干擾物
風(fēng)濕因子(RF)、黃疸等,類風(fēng)濕因子是可作用于多種動物以及人IgGFc段的自身抗體,多數(shù)為IgM類,能充當(dāng)抗原成分與固相及酶標(biāo)抗體反應(yīng),從而呈現(xiàn)非特異性顯色。
黃疸血標(biāo)本中常含有內(nèi)源性過氧化物酶,如用辣根過氧化物酶為標(biāo)記物,就有可能產(chǎn)生非特異性顯色。
2、2 外源性干擾物
小鼠ELISA試劑盒常因樣品采集、貯存、處理不當(dāng)造成如樣品溶血,被細(xì)菌污染,標(biāo)本凝集不全等。溶血標(biāo)本,紅細(xì)胞溶解破裂,釋放出血紅素形成,而血紅素中的鐵卟啉是過氧化物酶的類似物,以HRP為標(biāo)記的ELISA測定中,溶血標(biāo)本可能會增加非特異性顯色。如有細(xì)菌污染,菌體中可能含有內(nèi)源性HRP(辣根過氧化酶),有國內(nèi)報道酶免HBsAg試劑檢測溶血標(biāo)本時可造成假陽性。如在冰箱中保存過久,其中的IgG可發(fā)生聚合,在間接法ELISA中可使本底加深。因此,血標(biāo)本在采集處理時應(yīng)小心,在冰箱中保存不易過久。
標(biāo)本凝集不全時,血清中會殘留部分纖維蛋白原,也易造成假陽性。
Daphnetin 含量: 進(jìn)口/國產(chǎn) 瑞香素(祖師麻甲素) 20mg/支 英文名稱 HPLC≥98% 規(guī)格:
parthenolide 含量: 進(jìn)口/國產(chǎn) 小白菊內(nèi)酯 20mg/支 英文名稱 HPLC≥98% 規(guī)格:
Polyphyllin A 含量: 進(jìn)口/國產(chǎn) 20mg/支 英文名稱 HPLC≥98% 規(guī)格:
Polyphyllin B 含量: 進(jìn)口/國產(chǎn) 重樓皂甙B 20mg/支 英文名稱 HPLC≥98% 規(guī)格:
Polyphyllin C 含量: 進(jìn)口/國產(chǎn) 重樓皂甙C 20mg/支 英文名稱 HPLC≥98% 規(guī)格:
小鼠ELISA試劑盒
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