小鼠ELISA試劑盒提取質(zhì)粒的基本步驟
①細(xì)菌的培養(yǎng)和質(zhì)粒的擴(kuò)增

②細(xì)菌菌體的裂解
③質(zhì)粒DNA的純化
實(shí)驗(yàn)材料 大腸桿菌 
試劑、試劑盒 Tris-Hcl EDTA 葡萄糖 NaOH KAac NaAc 異丙醇 溶菌酶 酚:無(wú)水乙醇 LB培養(yǎng)基 
儀器、耗材 超凈工作臺(tái) 培養(yǎng)箱 搖床 恒溫水浴鍋 臺(tái)式離心機(jī) 取液器 低溫冰箱 冷凍真空干燥機(jī) 電泳儀 水平電泳槽 紫外觀測(cè)儀 

 
一、小鼠ELISA試劑盒材料與試劑準(zhǔn)備 
 
1.  材料：大腸桿菌。
 
2.  儀器：超凈工作臺(tái)，培養(yǎng)箱，搖床，恒溫水浴鍋，臺(tái)式離心機(jī)，取液器一套，低溫冰箱，冷凍真空干燥機(jī)，電泳儀，水平電泳槽，紫外觀測(cè)儀。
 
3.  試劑：
 
（1）Solution I ：25 mM Tris-Hcl（pH7.4），10 mM EDTA（pH8.0），50 mM葡萄糖，高壓滅菌，4℃保存。
（2）Solution II ：0.2 M NaOH， 1%SDS 現(xiàn)配現(xiàn)用。
（3）Solution III ：5 N KAc pH4.8，高壓滅菌，4℃保存。
（4）3 M NaAc PH5.2，高壓滅菌，4℃保存。
（5）異丙醇，溶菌酶（8 mg/ml），酚，無(wú)水乙醇，70%乙醇，LB培養(yǎng)基，電泳試劑。
 
二、操作步驟 
 
1.  細(xì)菌繁殖：LB培養(yǎng)基，2 ml/20ml，37℃，200 rpm，搖一搖，過(guò)夜。
 
2.  離心10 min，5 000 rpm， 4℃；棄上淸液。
 
3.  沉淀（菌體細(xì)胞）預(yù)冷的TES緩沖液洗滌，離心10 min，5 000 rpm， 4℃，加入預(yù)冷的1 ml Solution I，冰浴10 min。
 
4.  重新懸浮，加入150 ul溶菌酶母液，室溫放置5 min。
 
5.  加入1.2 ml Solution II， 冰浴5 min。
 
6.  加入0.9 ml預(yù)冷乙酸鉀，混勻，離心10 min，12 000 rpm，4℃。
 
7.  加入1.5 ml異丙醇，-20℃冰箱內(nèi)放置15 min。
 
8.  離心10 min，12 000 rpm，4℃。
 
9.  取沉淀，懸于400 ul TE緩沖液中。
 
10.  加入40 ul，3 M NaAc。
 
11.  酚，抽提，乙醇沉淀。
 
12.  離心10 min，12 000 rpm，4℃。
 
13.  小鼠ELISA試劑盒取沉淀，冷凍干燥，再懸浮于50 ul TE緩沖液中。
 
14.  電泳檢測(cè)提取DNA的質(zhì)量。