細(xì)胞復(fù)蘇的原則
在實(shí)際操作中，凍存細(xì)胞要進(jìn)行復(fù)蘇，再培養(yǎng)傳代。復(fù)蘇細(xì)胞一般采用快速融化法。以保證細(xì)胞外結(jié)晶快速融化，以避免慢速融化水分滲入細(xì)胞內(nèi)，再次形成胞內(nèi)結(jié)晶損傷細(xì)胞。
2. 細(xì)胞復(fù)蘇的主要操作步驟
(1)佩戴眼鏡和手套，從液氮罐中取出安瓿或冷凍管。
(2)迅速放入38℃水浴中，并不時(shí)搖動(dòng)，在1分鐘內(nèi)使其*融化，然后在無(wú)菌下取出細(xì)胞。
(3)在1000r/min速度下離心5～10分鐘，棄去上層液，加入適量培養(yǎng)液后接種于培養(yǎng)瓶中，接種濃度1×109/L，置37℃溫箱靜置培養(yǎng)，次日更換一次培養(yǎng)液，繼續(xù)培養(yǎng)，觀察生長(zhǎng)情況。若細(xì)胞密度較高，及時(shí)傳代?；驘o(wú)需離心直接將細(xì)胞加入瓶中，并加入培養(yǎng)基貼壁培養(yǎng)12～24小時(shí)后，充去上清，換入新鮮培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)。
3. 注意事項(xiàng)
在細(xì)胞復(fù)蘇操作時(shí)，應(yīng)注意融化凍存細(xì)胞速度要快，可不時(shí)搖動(dòng)安瓿或冷凍管，使之盡快通過(guò)zui易受損的溫度段(-5～0℃)。這樣復(fù)蘇的凍存細(xì)胞存活率高，生長(zhǎng)及形態(tài)良好。然而，由于凍存的細(xì)胞還受其他因素的影響，有時(shí)也會(huì)有部分細(xì)胞死亡。此時(shí)，可將不貼壁、飄浮在培養(yǎng)液上(已死亡)的細(xì)胞輕輕倒掉，再補(bǔ)以適量的新培養(yǎng)液，也會(huì)獲得較為滿意的結(jié)果。