試劑抗干擾作用的合理性
有些液體雙試劑，其實質(zhì)并不真正具備抗干擾的能力而只是解決了試劑的液體化和穩(wěn)定性問題。如，ALT試劑盒中，NADH在pH7.5~7.8水溶液中極不穩(wěn)定，在pH>8.7時才能穩(wěn)定保存。因此，為了保證試劑穩(wěn)定性，液體雙試劑的R1需要維持pH>8.7，但此時LDH活性大大下降，就失去消除內(nèi)源性丙酮酸的功能，只有加入試劑R2后，反應(yīng)混合液的pH下降至LDHzui適pH，在經(jīng)過延遲時間60 S后，才能消除內(nèi)源性丙酮酸的干擾。再如，Tfinder反應(yīng)中抗Vc干擾問題：由于維生素c易氧化，樣品中Vc會競爭反應(yīng)生成的過氧化氫，而產(chǎn)生負(fù)干擾。因此，在試劑R1中加入抗壞血酸氧化酶，這種方法是有效的，但不一定有很大的意義。因為Vc干擾必須同時具備二個條件：a)Vc攝入量較多；b)采血后立即測定。實驗表明離體血清中Vc在90 min后會全部被氧化。又如，使用胺類新色原。a)分子共軛結(jié)構(gòu)特性使得靈敏度提高，相應(yīng)可以減少樣本用量，zui終能有效地降低干擾物的量．b)使生成胺類色素原zui大吸收峰由500~520 nm移至550 nm以上，以避開黃疸、溶血干擾。如：亞鐵一H 0 ，能有效避免黃疸干擾的理論依據(jù)是亞鐵與H。0。親和力遠遠大于膽紅素。甘油三酯測定，有人主張選用雙試劑方法消除內(nèi)源性甘油，這個方法是可行的，但忽視了一個化學(xué)平衡理論。因為所有的酯在水溶液中都不是簡單地以酯的形式存在，而是以水解與酯化相平衡的形式存在。在一個平衡體系中，如果去除游離甘油，這個平衡就向生成甘油方向移動，甘油三酯就會重新水解，生成新的甘油，達到新的平衡，因此樣品與R1試劑孵育時間越長，測得甘油三酯值就越低。甘油三酯測定，不僅要去除游離甘油，而且還要克服樣本含量真實性發(fā)生的變化，試劑中必須加入甘油激酶，并且延遲時間要標(biāo)準(zhǔn)化。所以，一些試驗項目在消除內(nèi)源性物質(zhì)干擾的同時，會帶來樣品含量真實性的變化。