*代雜交俘獲試驗(yàn)(hybrid capture test-Ⅰ，HC-Ⅰ)  為克服基因擴(kuò)增技術(shù)的不足，幾年前美國(guó)Digene公司開(kāi)發(fā)出一種新的HPV DNA檢測(cè)技術(shù)——*代雜交俘獲試驗(yàn)(hybrid capture test-Ⅰ，HC-Ⅰ)。其原理是利用對(duì)抗體捕獲信號(hào)的放大和化學(xué)發(fā)光信號(hào)的檢測(cè)。HC-Ⅰ不需要基因擴(kuò)增，利用兩套單鏈全長(zhǎng)RNA混合探針，可以檢測(cè)5種低危型HPV(6, 11, 42, 43, 44)及9種高危型HPV(16, 18, 31, 33, 35, 45, 51, 52, 56 )。理論上檢測(cè)靈敏度是 50 000個(gè)HPV DNA拷貝。經(jīng)過(guò)臨床試驗(yàn)評(píng)價(jià)，HC-Ⅰ檢測(cè)靈敏度低于PCR及其他基因擴(kuò)增技術(shù)，但其特異度和陽(yáng)性預(yù)測(cè)值卻高于PCR。

    第二代雜交俘獲試驗(yàn)(hybrid capture test-Ⅱ，HC-Ⅱ)  zui近Digene公司推出的雜交捕獲二代試驗(yàn)( HC-II )更敏感，由原先的試管法改為96孔平板法，提高了工作效率，降低了成本，更適于大人群的篩查。該法同時(shí)能檢測(cè)13種高危型HPV (HPV16, 18, 31, 33, 35, 39, 45, 51, 52, 56, 58, 59和68型)，已得到世界范圍的認(rèn)可。Petry等^[8] 對(duì)德國(guó)8466例患者經(jīng)HC-Ⅱ檢測(cè)，發(fā)現(xiàn)HC-Ⅱ檢測(cè)宮頸上皮內(nèi)瘤變(cervical intraepithelial neoplasia，CIN)Ⅱ級(jí)的敏感性遠(yuǎn)較常規(guī)細(xì)胞學(xué)高，前者是97.8% ，而后者是43.5% ，而且HCⅡ檢測(cè)CINⅡ的特異性、陽(yáng)性預(yù)測(cè)值和陰性預(yù)測(cè)值分別為95.3% 、10.9%和100%，與細(xì)胞學(xué)檢測(cè)基本吻合。HC-Ⅱ檢測(cè)方法的缺點(diǎn)是不能測(cè)定具體的HPV型別。此外，HC-Ⅱ作為雜交反應(yīng)，存在交叉雜交的問(wèn)題，即與不在混合探針中的其他HPV型起交叉反應(yīng)引起假陽(yáng)性結(jié)果而降低特異性^[11]。ELISA試劑盒

   第三代(hybrid capture test-Ⅲ，HC-Ⅲ)  雜交捕獲Ⅲ(HC-Ⅲ)是Digene公司的新一代捕獲雜交法，和HCⅡ一樣也用RNA探針，但用一段帶有生物素的寡核苷酸代替HC-II中的特異性抗體，將RNA DNA雜交體固定在鏈霉素包被的孔中。由于這段寡核苷酸與HPV DNA的另一段序列互補(bǔ)，從而減少了非特異性雜交造成的假陽(yáng)性結(jié)果。而且這種檢測(cè)方法能特異性地檢測(cè)出靶序列的單個(gè)核苷酸的改變，從而使檢測(cè)HPV基因型變異體成為可能。HC-Ⅲ也用混合探針，故也不能對(duì)HPV進(jìn)行分型，加上的因素，使這種方法的研究和發(fā)展受到一定限制。

   HC Express Array技術(shù)：Digene公司在雜交捕獲法的基礎(chǔ)上結(jié)合基因芯片推出了HC Express Array技術(shù)。這項(xiàng)技術(shù)利用芯片上固定的病毒不同亞型的特異性DNA探針，對(duì)病毒進(jìn)行分型判斷，此技術(shù)目前用于基因表型分析的研究，且該技術(shù)快速分型和定量的特點(diǎn)使其在HPV的分型檢測(cè)中具有非常廣闊的應(yīng)用前景。ELISA試劑盒

    小結(jié)：HC操作比較簡(jiǎn)單，基本步驟如下：①樣本DNA雙鏈解離為單鏈；②DNA單鏈與全長(zhǎng)RNA探針結(jié)合為RNA-DNA雜交復(fù)合物；③包被在試管壁或微孔壁上的特異性抗體與RNA-DNA雜交復(fù)合物結(jié)合，使之固定；④結(jié)合有多個(gè)堿性磷酸酶的第二抗體與RNA-DNA雜交復(fù)合物結(jié)合，使信號(hào)放大；⑤堿性磷酸酶使酶底物發(fā)光，分光光度計(jì)測(cè)量發(fā)光強(qiáng)度后與標(biāo)準(zhǔn)值比較，通過(guò)堿性磷酸酶的含量確定RNA-DNA雜交復(fù)合物的含量。ELISA試劑盒

    但是，HC也有一定的局限性，主要有：①檢測(cè)結(jié)果陰性并不能排除HPV感染，因?yàn)榭赡艽嬖诓《靖腥舅胶艿突蛘卟蓸硬徽_導(dǎo)致的假陰性；②標(biāo)本采集及保存有特殊的要求，必須應(yīng)用Digene公司提供的器材及試劑，或者應(yīng)用液基細(xì)胞學(xué)剩余標(biāo)本；③不能區(qū)分HPV具體型別；④如果所得相對(duì)光單位值接近或者小于1. 0，則不能確定HPV感染。ELISA試劑盒