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中級(jí)會(huì)員 | 第15年

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稀釋平板分離法

時(shí)間:2016/1/29閱讀:641
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    細(xì)菌純種分離的方法有兩種:稀釋平板法。ELISA試劑盒

(一)稀釋平板分離法

1.取樣

用無菌錐形瓶到現(xiàn)場取一定量的活性污泥或土壤或湖水,迅速帶回實(shí)驗(yàn)室。

2.稀釋水樣

工作前,用鑷子取出一塊酒精棉球擦手、鑷子以及工作臺(tái),待工作臺(tái)干凈后,點(diǎn)燃酒精燈。將1瓶90m1和5管9m1的無菌水排列好,按10-1、10-2、10-3、10-4、10-5及10-6依次編號(hào)。在無菌操作條件下,用10m1的無菌移液管吸取10m1水樣 (或其他樣品10g)置于*瓶90m1無菌水 (內(nèi)含玻璃珠)中,將移液管吹洗3次,用手搖10分鐘將顆粒狀樣品打散。即為10-1濃度的菌液。用1m1無菌移液管吸取1m1的10-1濃度的菌液于一管9m1無菌水中,將移液管吹洗3次,搖勻即為10-2濃度菌液。用同樣的方法依次稀釋到10-6。ELISA試劑盒

3.平板的制作

    取10套無菌培養(yǎng)皿編號(hào),10-4、10-5、10-6各3個(gè),另1個(gè)為空氣對(duì)照。取1支1m1無菌移液管從濃度小的10-6菌液開始,以10-6、10-5、10-4為序分別吸取0.5m1菌液于相應(yīng)編號(hào)的培養(yǎng)皿內(nèi) (注:每次吸取前,用移液管在菌液中吹吸使菌液充分混勻)?;蛘咧苯佑梦⒘恳埔簶屢迫?.5ml菌液,每移一次換一個(gè)槍頭,移取液體前,用70%乙醇對(duì)進(jìn)入試管的槍體進(jìn)行擦拭消毒。加熱融化已滅菌的培養(yǎng)基,當(dāng)培養(yǎng)基冷卻至45℃左右時(shí),進(jìn)行無菌操作倒平板。倒入培養(yǎng)基后將培養(yǎng)皿平放在桌上,順時(shí)針和反時(shí)針來回轉(zhuǎn)動(dòng)培養(yǎng)皿,使培養(yǎng)基和菌液充分混勻,冷凝后即成平板,倒置于30℃恒溫箱中培養(yǎng)48小時(shí),然后觀察結(jié)果注:若在無菌室內(nèi)操作。取 “對(duì)照”的無菌培養(yǎng)皿,待平板待凝固后,打開皿蓋10分鐘后蓋上皿蓋,倒置30℃箱中培養(yǎng),48小時(shí)后觀察結(jié)果。ELISA試劑盒

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