根據(jù)標(biāo)記物的不同，免疫細(xì)胞化學(xué)技術(shù)可分為免疫熒光細(xì)胞化學(xué)技術(shù)、免疫酶細(xì)胞化學(xué)技術(shù)、免疫鐵蛋白技術(shù)等。近年來又發(fā)展了雜交免疫細(xì)胞化學(xué)技術(shù)、雙重和多重標(biāo)記技術(shù)等。常用的免疫酶細(xì)胞化學(xué)技術(shù)原理。不同的免疫細(xì)胞化學(xué)技術(shù)有各自*的試劑和方法，但基本技術(shù)是相似的，都包括抗體制備、組織材料處理、免疫染色、對(duì)照試驗(yàn)、顯微鏡觀察等步驟。

1．抗體制備

(1)抗體制備：抗體是免疫細(xì)胞化學(xué)技術(shù)TRY-試劑，應(yīng)具有高特異性、敏感性及價(jià)的單克隆和多克隆抗體。目前國(guó)內(nèi)外市場(chǎng)各種特異性抗體種類繁多，但要定位一種新的抗原物質(zhì)，自制抗體效果較好。

(2)抗體配制方法(包括抗體貯存液和抗體工作液配制方法)。

1)抗體貯存：獲得新抗體后，應(yīng)根據(jù)試劑公司提供的抗體效價(jià)將其分裝使用，密封后放人一20℃冰箱保存?zhèn)溆谩Ｒ话憧杀４?～2年?？贵w應(yīng)避免反復(fù)凍融而降低效價(jià)。

2)抗體工作液的配制：這是免疫細(xì)胞化學(xué)方法中zui重要的步驟之一?？贵w稀釋液的配制：常用0．01mol／L pH7．4 PBS或TBS緩沖液做抗體稀釋液。抗體稀釋液配制：取0．05mol／L pH7．4 TBS 100ml，加溫至60℃，再加入明膠lOOmg，攪拌溶解后，冷卻至室溫，加入lg牛血清白蛋白BSA和NaN3lO~20mg，溶解過濾分裝并4℃保存。

(3)抗體稀釋度測(cè)定方法：用已知陽(yáng)性抗原切片，進(jìn)行免疫染色，將其陽(yáng)性強(qiáng)度與背景染色強(qiáng)度以“+’’表示，可分為++++、+++、++、+、一，分別代表zui強(qiáng)陽(yáng)性，強(qiáng)陽(yáng)性，較強(qiáng)陽(yáng)性，弱陽(yáng)性，陰性。

1)直接測(cè)定法：用于測(cè)定*抗體的稀釋度，其他條件穩(wěn)定可靠。將一抗稀釋為1：50、I：100、l：200、1：400、1：500，5個(gè)稀釋度滴加在陽(yáng)性抗原切片上，同時(shí)設(shè)替代和陰性對(duì)照。

抗稀釋度為l：400時(shí)，結(jié)果呈強(qiáng)陽(yáng)性。背景染色減少，其稀釋度應(yīng)為1：400～500之間。將一抗再做1．1420、1：440、1：460、1：480和l：500倍稀釋，找出稀釋度。

2)棋盤(方陣)測(cè)定方法：當(dāng)測(cè)定兩種以上抗體的配合稀釋時(shí)，必須采用此種方法。

一抗l：10OO，二抗1：200接近稀釋度．再將一抗做l：600、1：700、1：800、1：900和1：1000倍稀釋，即可找出稀釋度。

2．組織材料處理組織材料處理是獲得免疫細(xì)胞化學(xué)結(jié)果的前提條件，需保證檢測(cè)細(xì)胞或組織取材新鮮，固定及時(shí)，形態(tài)保存完好，抗原物質(zhì)的抗原性不丟失、不擴(kuò)散及不被破壞。