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中級(jí)會(huì)員 | 第15年

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抗體標(biāo)記熒光染料的選擇方案

時(shí)間:2015/7/8閱讀:754
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藍(lán)色(350-450nm處激發(fā))
CF 350、Alexa Fluor 350、AMCA等----亮藍(lán)和紫外光激發(fā);
CF350是類似于Alexa Fluor 350和傳統(tǒng)熒光染料AMCA的藍(lán)色熒光染料,CF350的熒光強(qiáng)度高于Alexa Fluor350、AMCA , 吸附在蛋白上的熒光超過(guò)50%, 水溶性更好, 耐光性非常亮, 更容易與現(xiàn)有的綠色熒光基團(tuán)區(qū)分;
 CF 405S/ CF 405 M、Alexa Fluor 405 ----近乎的匹配藍(lán)色二極管激光器;
 CF 405S/ CF 405 M 、Alexa Fluor 405與近來(lái)使用的熒光顯微鏡和流式細(xì)胞儀405nm;譜線的藍(lán)色二極管激光器的匹配。在流式細(xì)胞儀上的分析結(jié)果顯示CF 405S/ CF 405 M熒光信號(hào)強(qiáng)度高于Alexa Fluor 405染料1.7倍。

綠色(488nm處激發(fā))
CF 488A、Alexa Fluor 488、FITC、FAM、DyLight 488、Cy2等----針對(duì)488nm 氬離子激光器的綠色熒光染料;
以上染料其標(biāo)記的抗體蛋白適用于所有配備488nm氬離子激光器的流式細(xì)胞儀;流式細(xì)胞儀的FL1通道檢測(cè);或者可用于熒光顯微鏡技術(shù);
CF 488Azui低限度的帶電量降低了與抗體耦聯(lián)物的非特異性結(jié)合;在紅色通道溢出少于Alexa Fluor 488;耐光性好;水溶性好和pH 不敏感;良好的穩(wěn)定性和活性染料的標(biāo)記率。
Alexa Fluor 488在較寬的PH值范圍內(nèi)保持穩(wěn)定(PH4~10);
FITC激發(fā)波長(zhǎng)488nm,zui大發(fā)射波長(zhǎng)525nm;缺點(diǎn)熒光強(qiáng)度易受PH值影響,PH值降低時(shí)其熒光強(qiáng)度減弱。

橙紅色(543-555nm處激發(fā))
CF 543、Alexa Fluor 546、ATTO550, Cy 3, DyLight 549, Rhodamine (TRITC) 匹配543nm的橙色熒光染料;細(xì)胞
CF ?543 熒光條帶明亮,耐光,水溶性好,確保了CF 543染料與抗體的耦聯(lián)物保持優(yōu)異的水溶性,為該波段zui亮的橙色熒光染料。例如:同等的標(biāo)記程度下,CF 543標(biāo)記的羊抗鼠IgG抗體的亮度高于用Alexa Fluor 546 標(biāo)記的2~10倍。
CF 555、Alexa Fluor 555、Tetramethylrhodamine (TAMRA) 等匹配Cy3濾光片的橙色熒光染料.

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