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在細胞周期的S期,和細胞一起孵育的BrdU能滲入DNA分子中,再結(jié)合BrdU抗體與滲入DNA的BrdU特異性結(jié)合,就能夠檢測到DNA復(fù)制活躍的細胞.但BrdU有一大缺點,就是需要變性DNA后才能與抗體結(jié)合,但這就破壞了DNA雙鏈結(jié)構(gòu),影響了其他染料的結(jié)合染色,導(dǎo)致染色彌散,準確性降低等問題。哈佛大學醫(yī)學院細胞生物學家Adrian Salic就認為:“為了能夠暴露BrdU的抗原表位,必須用高濃度的鹽酸,乙酸或酶解,但經(jīng)歷了如此嚴重的處理后,細胞原本精巧細致的結(jié)構(gòu)在顯微鏡下就變得慘不忍睹了。"
事實上,現(xiàn)在有一種新的檢測方法能避免這種情況的發(fā)生——EdU檢測。EdU (5-乙炔基-2’脫氧尿嘧啶核苷)也是一種胸腺嘧啶核苷類似物,但其連有的炔羥基團在天然化合物中很少見,在細胞增殖時能夠插入正在復(fù)制的DNA分子中,基于EdU與染料的共軛反應(yīng)可以進行快速的細胞增殖檢測分析,可以有效地檢測處于S期的細胞百分數(shù)。與傳統(tǒng)的免疫熒光染色(BrdU)檢測方法相比,更簡單,更快速,更準確。EdU只有BrdU抗體大小的1/500,在細胞內(nèi)更容易擴散,不需要嚴格的樣品變性(酸解、熱解、酶解)處理,有效地避免了樣品損傷,有助于在組織、器官的整體水平上觀測細胞增殖的真實情況,具有更高的靈敏度和更快的檢測速度。Adrian Salic特別強調(diào):“與傳統(tǒng)的免疫熒光染色不同,EdU反應(yīng)能在幾分鐘內(nèi)完成,且不需要進行嚴格的樣品變性處理,使得組織成像更簡單易行。"細胞增殖檢測方法基于EdU與Apollo?熒光染料的結(jié)合準確檢測新合成的DNA,簡單,快速,準確。這種檢測方法非常快速,且只需簡單的幾個步驟,因此也適用于高通量篩選試驗,如在藥物篩選中檢測加藥后細胞的活力。
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