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ELISA試劑盒控制細胞凋亡

時間:2015/5/15閱讀:558
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細胞凋亡過程中可觀察到系列形態(tài)學(xué)特征和生化特征。早期凋亡信號的效應(yīng)產(chǎn)生于胞內(nèi),此時細胞膜保持完整。MERCK公司已發(fā)展出幾種方法以檢測凋亡細胞胞內(nèi)的多種效應(yīng),包括:DNA 段的檢測、膜對稱性的變化、caspases激活、以及細胞死亡相關(guān)蛋白水平的變化等。多數(shù)檢測使用的底物和Marker適用于絕大多數(shù)種類的哺乳動物。
        凋亡細胞染色體DNA以核小體為單位的切割導(dǎo)致細胞不可逆死亡。可以采用Nucleosome ELISA試劑盒,對產(chǎn)生的單體及寡聚核DNA段進行定量。核小體的DNA成分被捕獲于酶標(biāo)板上,使用生物素標(biāo)記的抗組蛋白抗體檢測捕獲的核小體數(shù)量。組蛋白-DNA段的量反應(yīng)了一個特定樣品中死亡及瀕臨死亡的細胞的量。
        DNA段也可通過片段末端標(biāo)記進行原位檢測,MERCK提供基于TUNEL方法的ELISA試劑盒。DNA段末端標(biāo)記可通過熒光染料或比色底物方法進行檢測。另外,細胞形態(tài)的變化如胞膜皺摺或出泡、核染色質(zhì)致密、胞質(zhì)濃縮等,都可作為細胞凋亡的證據(jù)。采用熒光染料進行末端標(biāo)記的可用流式細胞技術(shù)進行定量,其光散射變化也可支持由單一參數(shù)得出的結(jié)論。DNA段可以從凋亡細胞中分離并使用瓊脂糖電泳進行分析。約180bp的多倍寡核小體片段在電泳上呈典型的梯狀條帶,可進一步證實凋亡的存在。若使用Pellet Paint Co-Precipitant,只需室溫操作,兩分鐘即幫助DNA沉淀更快捷方便。
        線粒體膜電位和膜通透性的變化也是凋亡細胞一個重要特點。凋亡細胞另一個生化特征是細胞膜內(nèi)側(cè)的磷脂酰絲氨酸從胞質(zhì)轉(zhuǎn)至胞外。膜聯(lián)蛋白中的Annexin Ⅴ,是一種磷脂結(jié)合蛋白,與磷脂酰絲氨酸有強親和力。通過使用Annexin Ⅴ-FITC(PF032)或AnnexinⅤ-Biotin Apoptosis Detection Kit,及RAPIDTM 方法進行凋亡細胞早期檢測??墒褂昧魇郊毎麅x或熒光顯微鏡監(jiān)測。同時使用PI,ELISA試劑盒根據(jù)細胞膜的通透性區(qū)分早期凋亡細胞和壞死細胞。

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