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上海信帆為你詳解抗體---單克隆抗體,多克隆抗體,一抗,二抗

2014-2-24  閱讀(4843)

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1.單克隆抗體的優(yōu)點(diǎn):
(1)雜交瘤可以在體外“*”地存活并傳代,只要不發(fā)生細(xì)胞株的基因突變,就可以不斷的生物試劑高特異性、高均一性的抗體。 
(2)可以用相對(duì)不純的抗原,獲得大量高度特異的、均一的抗體。 
(3)由于可能得到“無(wú)*”的均一性抗體,所以適用于以標(biāo)記抗體為特點(diǎn)的免疫學(xué)分析方法,如IRMA和ELISA等。 
(4)由于單克隆抗體的高特異性和單一生物學(xué)功能,可用于體內(nèi)的放射免疫顯像和免疫導(dǎo)向治療。
2.單克隆抗體的局限性:
(1)單克隆抗體固定的親和性和局限的生物活性限制了它的應(yīng)用范圍。由于單克隆抗體不能進(jìn)行沉淀和凝集反應(yīng),所以很多檢測(cè)方法不能用單克隆抗體完成。
(2)單克隆抗體的反應(yīng)強(qiáng)度不如多克隆抗體。 
(3)制備技術(shù)復(fù)雜,而且費(fèi)時(shí)費(fèi)工,所以單克隆抗體的價(jià)格也較高。

一抗和二抗的區(qū)別:

(1)初次反應(yīng)產(chǎn)生抗體:當(dāng)抗原*次進(jìn)入機(jī)體時(shí),需經(jīng)一定的潛伏期才能產(chǎn)生抗體,且抗體產(chǎn)生的量也不多,在體內(nèi)維持的時(shí)間也較短。

(2)再次反應(yīng)產(chǎn)生抗體:當(dāng)相同抗原第二次進(jìn)入機(jī)體后,開始時(shí),由于原有抗體中的一部分與再次進(jìn)入的抗原結(jié)合,可使原有抗體量略為降低。隨后,抗體效價(jià)迅速大量增加,可比初次反應(yīng)產(chǎn)生的多幾倍到幾十倍,在體內(nèi)留存的時(shí)間亦較長(zhǎng)。

(3)回憶反應(yīng)產(chǎn)生抗體:由抗原刺激機(jī)體產(chǎn)生的抗體,經(jīng)過(guò)一定時(shí)間后可逐漸消失。此時(shí)若再次接觸抗原,可使已消失的抗體快速上升。如再次刺激機(jī)體的抗原與初次相同,則稱為特異性回憶反應(yīng);若與初次反應(yīng)不同,則稱為非特異性回憶反應(yīng)。非特異性回憶反應(yīng)引起的抗體的上升是暫時(shí)性的,短時(shí)間內(nèi)即很快下降。

二抗廣義上是指專門和一抗進(jìn)行特異性反應(yīng)和結(jié)合的抗體,在免疫學(xué)反應(yīng)中,經(jīng)常需要針對(duì)試驗(yàn)選擇不同的二抗。檢測(cè)任何目的靶蛋白都有不止一種抗體可供選擇,同時(shí)在后繼試驗(yàn)中也會(huì)有不同的檢測(cè)方案,因此在選擇二抗的時(shí)候要綜合考慮一抗的類型及后繼檢測(cè)方案的要求,一般來(lái)說(shuō),選擇合適的二抗需要從下面幾個(gè)方面考慮:

【一抗的種屬來(lái)源】

二抗應(yīng)選用與使用的一抗相同的物種來(lái)源,例如:如果你的一抗是小鼠源的單克隆抗體,二抗則選抗小鼠的二抗(山羊抗小鼠或者兔抗小鼠等均可);如果一抗是從兔血清里制備的兔源多克隆抗體,則相應(yīng)的二抗需要選擇抗兔的二抗。即根據(jù)一抗的物種來(lái)源選擇相應(yīng)的抗該物種的二抗。

【一抗的類別亞型】

二抗需與一抗的類別或亞類相匹配。這通常是針對(duì)單克隆抗體而言。多克隆抗體主要是IgG類免疫球蛋白,因此相應(yīng)的二抗就是抗IgG抗體。其中單克隆抗體的類別及亞類通常會(huì)在產(chǎn)品說(shuō)明書中都會(huì)有描述,如果你的一抗是小鼠IgM,那么相應(yīng)的二抗就應(yīng)當(dāng)是抗小鼠IgM。如果單克隆一抗是小鼠IgG的某一亞類(IgG1,IgG2a,IgG2b,IgG3),那么幾乎所有的抗小鼠IgG都可以與之結(jié)合,或者你也可以選擇專門針對(duì)這一亞類的二抗,例如,如果你的一抗是小鼠IgG1,那么你可以選擇抗IgG1的二抗,此種抗體在雙標(biāo)記實(shí)驗(yàn)中尤其適合。在不清楚一抗為何種類/亞類的情況下,可以選用抗相應(yīng)物種IgG。艾美捷能為您提供通用的IgG(H+L)二抗,或者特異性只結(jié)合IgM的Anti IgM (mu) Antibody、IgA的Anti IgA (alpha-Antibody、IgE的Anti IgE (epsilon) Antibody等。

【二抗的種屬來(lái)源】

一般來(lái)說(shuō),不同的種屬來(lái)源與二抗的質(zhì)量沒有必然的,來(lái)源于山羊的二抗與來(lái)源于驢的二抗在一般的實(shí)驗(yàn)里沒有太多的差別。然而在一些特殊的實(shí)驗(yàn)里, 如雙標(biāo)實(shí)驗(yàn)里,如果其中一個(gè)一抗是山羊來(lái)源的,一個(gè)是小鼠來(lái)源的,則相應(yīng)的二抗分別要抗山羊和抗小鼠的二抗,這時(shí)候,二抗就不能選擇山羊或者小鼠來(lái)源的。 

【二抗的耦聯(lián)標(biāo)記】

一般來(lái)講,耦聯(lián)到二抗上的探針主要有酶(辣根過(guò)氧化酶HRP和堿性磷酸酶AP或其衍生物APAAP,PAP),熒光基團(tuán)(FITC、 Rhodamine、Texas Red、PE、Rhodamine、Dylight等)、生物素、金顆粒。選用哪種探針的二抗主要取決于具體的實(shí)驗(yàn)。對(duì)于Western Blot和ELISA,zui常用的二抗是酶標(biāo)二抗;而細(xì)胞或組織標(biāo)記實(shí)驗(yàn)(細(xì)胞免疫化學(xué),組織免疫化學(xué),流式細(xì)胞術(shù))中通常使用熒光基團(tuán)標(biāo)記的二抗,免疫組化中也可以使用辣根過(guò)氧化酶或堿性磷酸酶標(biāo)記的二抗。如果想要更大程度的放大檢測(cè)信號(hào),可以使用Biotin/Avidin檢測(cè)系統(tǒng)。在一些熒光檢測(cè)方案中,則需要選擇不同的熒光標(biāo)記;而金顆粒標(biāo)記的二抗則更多的應(yīng)用于免疫電鏡中。

【是否經(jīng)過(guò)血清吸附過(guò)的二抗】

為減少二抗與樣本的非特異性結(jié)合,為您提供不同血清吸附的*二抗。如您的檢測(cè)樣本是人源的蛋白,一抗是小鼠源的單克隆抗體,二抗就需要選擇抗小鼠源的二抗,如果您對(duì)實(shí)驗(yàn)的特異性要求很高,那我們向您推薦經(jīng)過(guò)人血清吸附過(guò)的抗小鼠源的二抗,這種二抗由于經(jīng)過(guò)人血清吸附而排除了與人源組織(如IgG等)可能發(fā)生非特異性反應(yīng)的IgG,因此將非特異性結(jié)合降低到zui低。

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