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谷胺酰胺合成酶（Glutamine synthetase，GS）試劑盒說(shuō)明書(shū)
100 管/48 樣
正式測(cè)定前務(wù)必取2-3 個(gè)預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測(cè)定
測(cè)定意義
GS（EC 6.3.1.2）主要存在于植物中，是生物體內(nèi)氨同化的關(guān)鍵酶之一，催化銨離子和谷氨
酸合成谷氨酰胺，不僅可以防止過(guò)多的銨離子對(duì)生物有毒性，而且谷氨酰胺也是氨的主要儲(chǔ)
存和運(yùn)輸形式。
測(cè)定原理
GS 在ATP 和Mg2+存在下，催化銨離子和谷氨酸合成谷氨酰胺；谷氨酰胺進(jìn)一步轉(zhuǎn)化為γ─
谷氨?；惲u肟酸，在酸性條件下與鐵形成紅色的絡(luò)合物；該絡(luò)合物在540nm 處有zui大吸
收峰，可用分光光度計(jì)測(cè)定。
所需的儀器和用品
可見(jiàn)分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、水浴鍋、臺(tái)式離心機(jī)、可調(diào)式移液器、微量石英比色皿/96 孔板、
研缽、冰和蒸餾水。
試劑的組成和配制
提取液：100mL×1 瓶，4℃保存。
試劑一：10mL×1 瓶，-20℃保存。
試劑二：10mL×1 瓶，-20℃保存。
試劑三：粉劑×2 瓶，-20℃保存。用時(shí)每瓶加入5mL 蒸餾水充分溶解備用，用不完的試劑仍
-20℃保存。
試劑四：15mL×1 瓶，4℃保存。
樣本測(cè)定的準(zhǔn)備
1、細(xì)菌、細(xì)胞或組織樣品的制備：
細(xì)菌或培養(yǎng)細(xì)胞：先收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi)，離心后棄上清；按照細(xì)菌或細(xì)胞數(shù)量
（104 個(gè)）：提取液體積（mL）為500~1000：1 的比例（建議500 萬(wàn)細(xì)菌或細(xì)胞加入1mL 提
取液），超聲波破碎細(xì)菌或細(xì)胞（冰浴，功率20％或200W，超聲3s，間隔10s，重復(fù)30 次）；
8000g 4℃離心10min，取上清，置冰上待測(cè)。
組織：按照組織質(zhì)量（g）：提取液體積(mL)為1：5~10 的比例（建議稱(chēng)取約0.1g 組織，
加入1mL 提取液），進(jìn)行冰浴勻漿。8000g 4℃離心10min，取上清，置冰上待測(cè)。
2、血清（漿）樣品：直接檢測(cè)。
測(cè)定步驟
1、 分光光度計(jì)或酶標(biāo)儀預(yù)熱30min 以上，調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至540nm，蒸餾水調(diào)零。
2、 在EP 管中加入下列試劑：
試劑名稱(chēng)（μL） 測(cè)定管 對(duì)照管
試劑一 160
試劑二 160
試劑三 70 70
樣本 70 70
混勻，37℃（哺乳動(dòng)物）或25℃（其他物種）準(zhǔn)確水浴30min
試劑四 100 100
混勻，靜置10min 后，8000g，25℃離心10min，取200μL 上清液至微量石英比色皿或96
孔板中，測(cè)定540nm 處的吸光值A(chǔ)?！鰽=A 測(cè)定管-A 對(duì)照管。每個(gè)測(cè)定管需設(shè)一個(gè)對(duì)照管。
GS 活力單位的計(jì)算
a.用微量石英比色皿測(cè)定的計(jì)算公式如下
1、血清（漿）GS 活性
單位定義：每mL 血清（漿）在每mL 反應(yīng)體系中每min 使540 下吸光值變化0.01 定義為
一個(gè)酶活力單位。
計(jì)算公式：
GS（U/mL）=ΔA×V 反總÷V 樣÷0.01÷T =19×ΔA
2、組織、細(xì)菌或細(xì)胞GS 活性
（1）按樣本蛋白濃度計(jì)算：
單位的定義：每mg 組織蛋白在每mL 反應(yīng)體系中每min 使540nm 下吸光值變化0.01 定義
為一個(gè)酶活力單位。
GS（U/mg prot）＝ΔA×V 反總÷（Cpr×V 樣）÷0.01÷T =19×ΔA÷Cpr
（2）按樣本鮮重計(jì)算：
單位的定義：每g 組織在每mL 反應(yīng)體系中每min 使540nm 下吸光值變化0.01 定義為一個(gè)
酶活力單位。
GS（U/g 鮮重）＝ΔA×V 反總÷(W× V 樣÷V 樣總)÷0.01÷T =19×ΔA÷W
（3）按細(xì)菌或細(xì)胞密度計(jì)算
單位定義：每1 萬(wàn)個(gè)細(xì)菌或細(xì)胞在每mL 反應(yīng)體系中每min 使540nm 下吸光值變化0.01 定
義為一個(gè)酶活力單位。
GS（U/104 cell）＝ΔA×V 反總÷(500×V 樣÷V 樣總)÷0.01÷T =0.038×ΔA
V 反總：反應(yīng)體系總體積，0.4mL； V 樣：加入樣本體積，0.07mL；V 樣總：加入提取液
體積，1 mL；T：反應(yīng)時(shí)間，30 min；Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/mL；W：樣本質(zhì)量，g；
500：細(xì)菌或細(xì)胞總數(shù)，500 萬(wàn)。
b.用96 孔板測(cè)定的計(jì)算公式如下
1、血清（漿）GS 活性
單位定義：每mL 血清（漿）在每mL 反應(yīng)體系中每min 使540 下吸光值變化0.005 定義為
一個(gè)酶活力單位。
計(jì)算公式：
GS（U/mL）=ΔA×V 反總÷V 樣÷0.005÷T =38×ΔA
2、組織、細(xì)菌或細(xì)胞GS 活性
（1）按樣本蛋白濃度計(jì)算：
單位的定義：每mg 組織蛋白在每mL 反應(yīng)體系中每min 使540nm 下吸光值變化0.005 定義
為一個(gè)酶活力單位。
GS（U/mg prot）＝ΔA×V 反總÷（Cpr×V 樣）÷0.005÷T =38×ΔA÷Cpr
（2）按樣本鮮重計(jì)算：
單位的定義：每g 組織在每mL 反應(yīng)體系中每min 使540nm 下吸光值變化0.005 定義為一
個(gè)酶活力單位。
GS（U/g 鮮重）＝ΔA×V 反總÷(W× V 樣÷V 樣總)÷0.005÷T =38×ΔA÷W
（3）按細(xì)菌或細(xì)胞密度計(jì)算
單位定義：每1 萬(wàn)個(gè)細(xì)菌或細(xì)胞在每mL 反應(yīng)體系中每min 使540nm 下吸光值變化0.005
定義為一個(gè)酶活力單位。
GS（U/104 cell）＝ΔA×V 反總÷(500×V 樣÷V 樣總)÷0.005÷T =0.076×ΔA
V 反總：反應(yīng)體系總體積，0.4mL； V 樣：加入樣本體積，0.07mL；V 樣總：加入提取液
體積，1 mL；T：反應(yīng)時(shí)間，30 min；Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/mL；W：樣本質(zhì)量，g；
500：細(xì)菌或細(xì)胞總數(shù)，500 萬(wàn)。

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