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構(gòu)建攜帶ACE2基因的慢病毒表達(dá)載體,觀察其感染人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞后ACE2表達(dá)增加對血管緊張素2誘導(dǎo)人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞增殖活性降低與凋亡增加的影響,初步探討該影響的機(jī)制。
方法1.采用PCR技術(shù)從含有ACE2基因的質(zhì)?？寺∧０錺c-DNA3.1-hygro(+)-mACE2上釣取ACE2基因,并將ACE2基因重組到慢病毒載體表達(dá)質(zhì)粒pGC-FU中,構(gòu)建重組慢病毒載體表達(dá)質(zhì)粒pGC-FU-ACE2,通過酶切、測序驗證ACE2基因后,將pGC-FU-ACE2質(zhì)粒和包裝質(zhì)粒pHelper1.0,pHelper2.0共同轉(zhuǎn)染人胚胎腎上皮細(xì)胞系293T細(xì)胞,獲得攜帶ACE2基因的重組慢病毒(Lentiviral-ACE2)。
2.以感染復(fù)數(shù)為10(MOI=10)感染人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞,感染72小時后通過RT-PCR,Western-blot檢測各組細(xì)胞ACE2基因的轉(zhuǎn)錄和蛋白表達(dá)水平
3.利用上海信帆的人血管緊張素2ELISA試劑盒檢測ANG 2的濃度,初步探討ACE2發(fā)揮上述作用的機(jī)制。
4. 化驗結(jié)果臨床意義
降低：見于原發(fā)性醛固酮增多癥、晚期腎功能衰竭等。
升高：見于原發(fā)性高血壓及其他類型的高血壓，分泌腎素的腎球旁器增生癥或腫瘤。
