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沉淀型單組分TMB底物溶液使用說(shuō)明
產(chǎn)品簡(jiǎn)介:
TMB（四甲基聯(lián)苯胺；3，3’，5，5’-Tetramethylbenzidine）是檢測(cè)
辣根過(guò)氧化物酶（HRP）的靈敏顯色底物之一。 我公司研究開(kāi)發(fā)的沉淀型單組份
TMB顯色底物液，適用于檢測(cè)膜上蛋白質(zhì)的免疫學(xué)實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示。本產(chǎn)品主要由
TMB和優(yōu)化的反應(yīng)緩沖液組成。免疫反應(yīng)固定的HRP可催化本產(chǎn)品形成不溶性的
藍(lán)色絡(luò)合物，并沉淀結(jié)合在膜上，顯示目的蛋白的位置及表達(dá)量。
適用范圍:
Western Blot
其它通過(guò)沉淀反應(yīng)檢測(cè)HRP的應(yīng)用
主要成分：
產(chǎn)品使用說(shuō)明:
本說(shuō)明書是沉淀型單組分TMB底物溶液的一般使用說(shuō)明，每個(gè)系統(tǒng)根據(jù)經(jīng)驗(yàn)來(lái)優(yōu)化。
注意：
1、顯色時(shí)間過(guò)長(zhǎng)可能導(dǎo)致底物沉淀從膜上脫落或背景加深。
2、顏色變化的快慢很大程度上取決于蛋白量、抗體使用量以及所使用的封閉液種類等。
1. TMB
2. H2O2及特殊的穩(wěn)定劑
3. 導(dǎo)致TMB反應(yīng)產(chǎn)物沉淀的特制化合物
自備溶液
PBS-T：PBS中含0.05%的Tween-20。
Western Blot膜封閉液
以合適的稀釋比率稀釋在封閉液中的一抗。每個(gè)系統(tǒng)一抗的最佳稀釋比率根據(jù)經(jīng)驗(yàn)來(lái)決定。
以合適的稀釋比率稀釋在封閉液中的HRP標(biāo)記的二抗。每個(gè)系統(tǒng)二抗的最佳稀釋比率根
據(jù)經(jīng)驗(yàn)來(lái)決定。
操作步驟
1. 將膜從轉(zhuǎn)膜系統(tǒng)中取出后在封閉液中室溫?fù)u動(dòng)封閉30~60分鐘。
2. 加一抗室溫?fù)u動(dòng)孵育1~2小時(shí)。
3. 用PBS-T洗膜三次，再用PBS洗滌一次。
4. 加HRP標(biāo)記的二抗室溫?fù)u動(dòng)孵育1小時(shí)。
5. 用PBS-T洗膜三次，再用PBS洗滌一次。
6. 將膜浸入沉淀型單組分TMB底物溶液中，反應(yīng)2－30分鐘（根據(jù)顏色變化
掌握染色時(shí)間）。
7. 顯色完成后，用蒸餾水沖洗可終止顯色反應(yīng)。
