我將操作中各個環(huán)節(jié)常出現(xiàn)問題的原因及解決辦法總結(jié)于下，以期給同行帶來一些啟發(fā)，提高試驗質(zhì)量。

1 選擇試劑 選擇質(zhì)量優(yōu)良的檢測試劑，嚴格按照試劑說明書進行操作，操作前將試劑在室溫下平衡30-60分鐘。

2 加樣 可能原因：

( 1)血清或血漿標本分離不好即進行加樣；

(2)手工操作中，加樣板過多造成加樣后放入孵箱前等待時間過長（特別是室內(nèi)溫度較高時）；

(3)加完標本再加酶試劑時酶濺出孔外。

 解決辦法：

(1)標本為血清：將血液先自然存放1-2小時后，再用3000rmp離心15分鐘；標本為血漿：必須使用含抗凝劑的血液標本收集管，ELISA試劑盒采血后必須立即顛倒采血管混合5-10次，放置一段時間后，3000rpm離心15分鐘；若在幾天內(nèi)檢測，可放在2-8℃冰箱中，若要貯存，則置于-20℃的低溫冰箱內(nèi)。

(2)加樣后及時放入孵箱。

(3)加酶試劑后用吸水紙在酶標板表面輕拭吸干。

(4)如果采用AT或其他全自動加樣，選擇FAME或其他后處理儀器加酶試劑。

(5)標本較多時，請分批操作。

3 孵育 可能原因：

(1)孵育時未貼封片或加蓋，使標本或稀釋液蒸發(fā)，吸附于孔壁，難于清洗*；

(2)孵育時間人為延長，導致非特異性結(jié)合緊附于反應孔周圍，難以清洗*。 

解決辦法：

(1)貼封片或加蓋；

(2)按說明步驟嚴格控制操作時間。

4 洗板 可能原因：

(1)采用手工洗板,孔與孔之間液體交叉。

(2)采用半自動洗板機洗板時，ELISA試劑盒洗液量不足，導致洗板不*；洗板針堵塞，抽吸不*；洗板不暢，導致洗板效果差。

(3)反應板過多造成洗板等待時間長。