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ELISA試劑盒技能的-操作關(guān)鍵
的試劑,杰出的儀器和正確的操作是確保ELISA檢測成果牢靠的必要條件。ELISA試劑盒的操作因固相載體的形成不同而有所差異,國內(nèi)醫(yī)學(xué)查驗一般均用板式點.本文將敘說板式留意關(guān)鍵,要具體的使用說明,嚴(yán)厲遵循規(guī)定操作,必能得出的成果.

1，試劑的預(yù)備
按試劑盒說明書的要求預(yù)備實驗中需用的試劑.ELISA試劑盒頂用的蒸餾水或去離子水,包含用于洗刷的,應(yīng)為新鮮的和高質(zhì)量的.自配的緩沖液使用pH計測量較正.從冰箱中取出的試 驗用試劑應(yīng)待溫度與室溫平衡后使用.試劑盒中本次實驗不需用的部分應(yīng)及時放回冰箱保存.

2，加樣
在ELISA中一般有3次加樣步聚,即加標(biāo)本,加酶結(jié)合物,加底物.加樣時應(yīng)將所加物加在LEISA板孔的底部,防止加在孔壁上部 ,并留意不行濺起,不行發(fā)生氣泡.

3，標(biāo)本的采納和保存
可用作 ELISA測定的標(biāo)本非常廣泛,體液(如血清),分泌物(唾液)和排泄物(如尿液,糞便)等。均可作標(biāo)本以測定其間某種抗體或抗原 成份.有些標(biāo)本可直接進(jìn)行測定(如血清,尿液),有些則需經(jīng)預(yù)處理(如糞便和某些分泌物).大部分ELISA檢測均以血清為標(biāo)本 .血漿中除尚含有纖維蛋白原和抗凝劑外,其他成份均平等于血清.制備血漿標(biāo)本需借助于抗凝劑,而血清標(biāo)本只需待血清自然凝結(jié),縮短后即可取得.除特殊情況外,在醫(yī)學(xué)查驗中均以血清作為檢測標(biāo)本.在ELISA中血漿和血清可平等使用.血清標(biāo)本可按慣例辦法收集,應(yīng)留意防止溶血,紅細(xì)胞溶解時會釋放出具有過氧化物酶活性的物質(zhì),以HRP為符號的ELISA測定中,溶血標(biāo)本可能會添加非特異性顯色.

血清標(biāo)本宜在新鮮時檢測.如有細(xì)菌污染,菌體中可能含有內(nèi)源性HRP,也會發(fā)生假陽性反應(yīng).如在冰箱中保存過久,其間的可發(fā)生聚合,在間接法ELISA中可使本底加深.一般說來,在5天內(nèi)測定的血清標(biāo)本可放置于4℃,超越一周測定的需低溫冰存.凍住血清融解后,蛋白質(zhì)局部濃縮,分布不均,應(yīng)充沛混勻宜輕緩,防止氣泡,可上下顛倒混和,不要在混勻器上激烈振動.混濁或有沉積的血清標(biāo)本應(yīng)先離心或過濾,澄清后再檢測.重復(fù)凍融會使抗體效價下跌,所以測抗體的血清標(biāo)本如需保存作屢次檢測,宜少數(shù)分裝冰存.保存血清自收集時就應(yīng)留意無菌操作,也可參加恰當(dāng)防腐劑.