一、酶免ELISA試劑盒特異性要素

1、固相載體的挑選.ELISA中常用的固相載體有微量滴定板、小珠和小試管三種,以微量滴定板zui為常見(jiàn).它具有超卓的吸附功用,孔底透明度高,空白值低,各板之間、同一板各孔之間功用附近.聚苯乙烯ELISA板因?yàn)橘Y料的不一樣和制作技能的不同,各產(chǎn)品的質(zhì)量差異很大.因而,在挑選試劑盒一起要對(duì)其運(yùn)用的微孔板類型進(jìn)行認(rèn)證,評(píng)估。

2、包被物的純度.在酶聯(lián)免疫測(cè)定特別是直接ELISA中,試劑的特異性取決于運(yùn)用抗原的純度.現(xiàn)在因?yàn)榧寄軛l件的捆綁,包被用抗原或抗體的純度不或許抵達(dá)100%,所以有些非特異性顯色不行避免,只能盡或許行進(jìn)純度,行進(jìn)特異性.現(xiàn)在運(yùn)用的包被抗原一般為組成多肽抗原. 

3、包被抗體的效價(jià).具有高親和力和高特異性的包被抗體,是抉擇試劑特異性的首要方面。

4、關(guān)閉.是ELISA中首要的一步,意圖是關(guān)閉固相載體表面尚未被所占有的空位,減少后續(xù)進(jìn)程中非特異性蛋白的干擾。
 
二、ELISA試劑盒查驗(yàn)標(biāo)本中含有酶符號(hào)物的干擾物

1、內(nèi)源性干擾物:類風(fēng)濕因子（RF）、黃疸等,類風(fēng)濕因子是可作用于多種動(dòng)物以及人IgGFc段的自身抗體,大都為IgM類,能充當(dāng)抗原成分與固相及酶標(biāo)抗體反響,然后呈現(xiàn)非特異性顯色。

2、外源性干擾物,常常因樣品收集、儲(chǔ)存、處理不妥構(gòu)成如樣品溶血,被細(xì)菌污染,標(biāo)本凝聚不全等.溶血標(biāo)本,紅細(xì)胞溶解分裂,釋放出血紅素構(gòu)成,而血紅素中的鐵卟啉是過(guò)氧化物酶的類似物,以HRP為符號(hào)的ELISA測(cè)定中,溶血標(biāo)本或許會(huì)增加非特異性顯色.如有細(xì)菌污染,菌體中或許含有內(nèi)源性HRP（辣根過(guò)氧化酶）,有國(guó)內(nèi)報(bào)導(dǎo)酶免HBsAg試劑檢查溶血標(biāo)本時(shí)可構(gòu)成假陽(yáng)性。

 
三、ELISA試劑盒操作進(jìn)程中的疑問(wèn)構(gòu)成假陽(yáng)性 

1、加樣 ：關(guān)于直接ELISA標(biāo)本一般都要進(jìn)行稀釋,假定加樣不準(zhǔn)就會(huì)構(gòu)成過(guò)失,特別當(dāng)稀釋倍數(shù)大時(shí),很小的肯定過(guò)失,會(huì)致使較大的相對(duì)過(guò)失,使陰性（或弱陽(yáng)性）標(biāo)本呈陽(yáng)性（或陰性）.加樣時(shí)應(yīng)將所加物加在ELISA板孔的底部,避免加在孔壁上部,并留心不行濺起,不行發(fā)作氣泡。

2、洗刷：在ELISA中準(zhǔn)確的洗刷是確保得到可重復(fù)作用的關(guān)健一步,應(yīng)引起操作者注重.無(wú)論是手工操作仍是機(jī)器操作,得出不準(zhǔn)確的作用常與不準(zhǔn)確的洗刷有關(guān),ELISA就是靠洗刷來(lái)抵達(dá)分別游離和聯(lián)絡(luò)的酶符號(hào)物的意圖.經(jīng)過(guò)洗刷以消除殘留在板孔中沒(méi)能與固體抗原或抗體聯(lián)絡(luò)的物質(zhì),以及在反響進(jìn)程中非特異性吸附于固相載體的干擾物質(zhì)。

3 、溫育 ：每種試劑都有其反響方法,其間溫度和溫育時(shí)刻操控是首要要素.因孵育溫度高,反響時(shí)刻長(zhǎng),會(huì)構(gòu)成整板本底高,陽(yáng)性率高.溫育一般用濕盒或水浴,反響板不宜疊放,以確保各板溫度都能靈敏平衡,為避免蒸騰,板上應(yīng)加蓋。

4、酶標(biāo)儀判讀 ：作為記載測(cè)定作用的儀器,酶標(biāo)儀的功用安穩(wěn)與否,抉擇作用的牢靠度.首要酶標(biāo)儀應(yīng)守時(shí)進(jìn)行保護(hù),對(duì)濾光片要守時(shí)校正;其次酶標(biāo)儀波長(zhǎng)設(shè)置要準(zhǔn)確,運(yùn)用雙波長(zhǎng),一個(gè)檢查波長(zhǎng),一個(gè)參比波長(zhǎng),以消除微孔板底部劃痕、不平、指印或液面高度差異構(gòu)成的光干擾.此外,在用酶標(biāo)儀讀數(shù)時(shí)先擦試微孔板底部并壓平板條。

綜上所述,因?yàn)槊嘎?lián)免疫吸附技能現(xiàn)在在技能上短少標(biāo)準(zhǔn)化,盡管現(xiàn)在上以及我國(guó)有了部分標(biāo)準(zhǔn)血清或參比血清（血清盤）.但因?yàn)槭芊椒▽W(xué)及技能條件的捆綁,在酶聯(lián)吸附測(cè)定中有時(shí)不行避免的會(huì)呈現(xiàn)必定的非特異性,但我們能夠經(jīng)過(guò)以上措施把非特異性顯色降至zui低限底,然后行進(jìn)檢查的特異性,并得到更準(zhǔn)確、牢靠的實(shí)驗(yàn)作用。