ELISA試劑盒操作較冗雜,在操作中應(yīng)留意以下5個(gè)方面。
1. 跟著病情的發(fā)展或由別的要素影響，某些抗體在機(jī)體內(nèi)的含量發(fā)生大幅動(dòng)搖，因此有必要對(duì)標(biāo)本進(jìn)行預(yù)處理。直接法測(cè)定中，標(biāo)本恰當(dāng)稀釋還可下降非特異性反響。

2. 洗刷是ELISA試劑盒操作過程中決議試驗(yàn)成敗的一個(gè)關(guān)鍵過程。意圖是除掉未的免疫反響物，停止抗原抗體反響，除掉標(biāo)本中與反響無關(guān)的成分、游離的酶標(biāo)物以及反響過程中吸附于固相載體上的非特異性物質(zhì)?？捎孟窗鍣C(jī)洗板或手藝洗板，前者洗刷質(zhì)量較好，各反響孔洗刷作用均一，批內(nèi)、批間區(qū)別小，手藝洗板應(yīng)留意操控各孔洗刷作用，區(qū)別不宜太大。

3. 斷定成果須運(yùn)用ELISA試劑盒測(cè)讀儀，比色法判讀可選擇單波長或雙波長，依據(jù)反響液色彩的不一樣選用不一樣波長的濾光片，以空白孔校零測(cè)定反響孔的吸光度值。酶標(biāo)儀具有杰出的重復(fù)性。

4. 加樣通常運(yùn)用加液器，在ELISA試劑盒中通常有4次加樣：加標(biāo)本、加酶物、加底物和加停止液。加標(biāo)本時(shí)必須每份標(biāo)本運(yùn)用一支移液器吸嘴，避免交叉污染。加酶物、底物和停止液時(shí)則不需更換吸嘴。

5. 在成批手藝檢查中，還應(yīng)留意操作時(shí)差的影響。加樣及混勻時(shí)刻的區(qū)別，使抗原抗體反響和酶促反響時(shí)刻不一致，對(duì)競爭法及定量檢查影響很大，不留意可能會(huì)致使錯(cuò)誤成果或定量不準(zhǔn)。

ELISA試劑盒測(cè)定過程：固相包被→加待測(cè)樣品→溫育→洗刷+加酶標(biāo)物→溫育→洗刷→加底物→溫育一加停止液→比色→斷定成果。