微生物營(yíng)養(yǎng)和環(huán)境條件實(shí)驗(yàn)
實(shí)驗(yàn)用品
接種環(huán)、酒精燈、9 mL無(wú)菌水、1 mL無(wú)菌吸管、無(wú)菌水、無(wú)菌平皿、玻璃刮鏟、滅菌五角星形圖案紙(牛皮紙或黑紙)、紫外燈箱、無(wú)菌鑷子、直徑0.6cm的無(wú)菌圓形濾紙片；或其它實(shí)驗(yàn)用品。
實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)方案的基本要求
本實(shí)驗(yàn)是在已經(jīng)做了微生物的一些基本實(shí)驗(yàn)和綜合實(shí)驗(yàn)的基礎(chǔ)上進(jìn)行的，實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)方案中應(yīng)簡(jiǎn)明地闡述實(shí)驗(yàn)?zāi)康?、原理、材料、?shí)驗(yàn)方法、觀測(cè)結(jié)果以及結(jié)果分析等內(nèi)容。
(一)擬訂實(shí)驗(yàn)?zāi)康?br />
實(shí)驗(yàn)?zāi)康膽?yīng)該寫(xiě)明：通過(guò)何種設(shè)計(jì)方案，采用哪種方法，說(shuō)明哪些因素對(duì)微生物生長(zhǎng)有影響，影響程度如何；從本次實(shí)驗(yàn)本人可以獲得哪些收獲等等。
(二)確定實(shí)驗(yàn)原理
對(duì) 自己的實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)方案、方法從理論上說(shuō)明依據(jù)。如微生物生長(zhǎng)需要哪些營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，包括有機(jī)物、礦質(zhì)營(yíng)養(yǎng)元素；微生物與氧氣的關(guān)系；微生物的生長(zhǎng)溫度范圍；微生 物生長(zhǎng)繁殖需要的酸堿度即pH值環(huán)境；紫外線對(duì)微生物的作用；化學(xué)藥劑對(duì)微生物的生長(zhǎng)抑制或殺死作用等等，應(yīng)根據(jù)試驗(yàn)?zāi)康撵`活選擇。
(三)確定實(shí)驗(yàn)材料
實(shí)驗(yàn)材料應(yīng)根據(jù)自己的實(shí)驗(yàn)?zāi)康膩?lái)確定，可以是實(shí)驗(yàn)室已有的活菌種，也可以是自己從環(huán)境中分離得到的微生物材料。
(四)設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)方法
實(shí)驗(yàn)方法的確定也應(yīng)該根據(jù)實(shí)驗(yàn)?zāi)康倪M(jìn)行。應(yīng)該包括菌種的選擇、配制何種培養(yǎng)基、需要哪些器材和藥品、怎樣接種、怎樣培養(yǎng)、怎樣觀察結(jié)果等等?？晒﹨⒖嫉膶?shí)驗(yàn)方法如下：
1、營(yíng)養(yǎng)元素對(duì)黑曲霉生長(zhǎng)的影響
⑴制備培養(yǎng)基：本實(shí)驗(yàn)分組配制培養(yǎng)基，培養(yǎng)基配方見(jiàn)附錄1-8。培養(yǎng)基分裝試管，每管裝量4～5mL，0.1MPa滅菌30min后備用。
?、奇咦討乙褐苽洌喝o(wú)菌水1支，用接種環(huán)從黑曲霉斜面菌種管中挑取菌體2～3環(huán)，放入水中，充分混勻，備用。
⑶接種：每人取*、缺C、缺N、缺P(pán)、缺K和缺Zn培養(yǎng)液各一支，用1 mL無(wú)菌吸管按無(wú)菌操作法接種黑曲霉孢子懸液0.5 mL。本實(shí)驗(yàn)按每4人取一套培養(yǎng)基不接種作為對(duì)照。
?、扔^察：接種后，將培養(yǎng)管置28℃溫度下培養(yǎng)5～7d ,觀察黑曲霉菌絲及孢子生長(zhǎng)情況?！镌撛囼?yàn)用細(xì)菌類微生物作試驗(yàn)菌種能觀察到明顯的結(jié)果嗎？為什么？
2、氧氣對(duì)微生物生長(zhǎng)的影響
?、啪鷳乙褐苽洌河媒臃N環(huán)按無(wú)菌操作法取根瘤菌、巴斯德梭菌、大腸桿菌1～2環(huán)分別放入三支無(wú)菌水中制成菌懸液。
⑵接種：取已熔化并保溫在50℃左右的培養(yǎng)基6支，用無(wú)菌吸管分別及取菌懸液0.2 mL接種到培養(yǎng)管中，每種試驗(yàn)菌接種2個(gè)重復(fù)，接種后立即置振蕩器上混勻，并冷凝。
⑶培養(yǎng)：置培養(yǎng)管于28～30℃下培養(yǎng)3d。
?、冉Y(jié)果檢查：取出培養(yǎng)管，觀察并記錄每支培養(yǎng)管的上、中、下各層次中細(xì)菌的菌苔大小，菌體集中分布的位置，以了解氧氣對(duì)幾種細(xì)菌生長(zhǎng)的影響。
3、溫度對(duì)微生物生長(zhǎng)的影響
?、沤臃N：蛋白胨瓊脂斜面培養(yǎng)基8支，用接種環(huán)按無(wú)菌操作法分別在斜面上劃線接種大腸桿菌與枯草桿菌，勿劃破培養(yǎng)基。
?、婆囵B(yǎng)：將已接種的斜面培養(yǎng)基，分別放在4℃、28℃、37℃和45℃四種溫度下培養(yǎng)。
?、怯^察：培養(yǎng)48h、72h后觀察生長(zhǎng)狀況，根據(jù)菌苔的大小確定其生長(zhǎng)zui適溫度。
4、氫離子濃度對(duì)微生物生長(zhǎng)的影響
?、排囵B(yǎng)基制備：分組按下列配方配制不同pH值的培養(yǎng)基，并用pH計(jì)校證pH值，然后分裝入試管中，每管裝量5～6 mL,0.1Mpa滅菌30min備用，見(jiàn)表。
?、平臃N培養(yǎng)：取供試pH培養(yǎng)基三組用接種環(huán)按無(wú)菌操作法于試管中分別接入大腸桿菌、吸水鏈霉菌、黑曲霉。在37℃下培養(yǎng)48h。
⑶檢查結(jié)果：出取培養(yǎng)物，觀察并記錄實(shí)驗(yàn)結(jié)果。
實(shí)驗(yàn)材料
1、 活材料：培養(yǎng)3d的黑曲霉(Aspergillus niger)、根瘤菌(Rhizobium sp.)、培養(yǎng)24h的大腸桿菌(E. coli)、巴斯德梭菌(Clostridium pasteurianum)、枯草桿菌(Bacillus subtilis)、培養(yǎng)5d的吸水鏈霉菌“5102”(Sterptomyces hygroscopicus “5102”)、培養(yǎng)24～48h的金葡萄球菌(Staphylococcus aureus)及黏質(zhì)沙雷氏菌(Serratia marcescens)的斜面菌種；其它自選的微生物材料，包括實(shí)驗(yàn)室已有的和自己從環(huán)境中分離得到的均可。
2、 培養(yǎng)基：原則上可以參考以下培養(yǎng)基：*培養(yǎng)基、缺C培養(yǎng)基、缺N培養(yǎng)基、缺P(pán)培養(yǎng)基、缺K培養(yǎng)基、缺Zn培養(yǎng)基。
3、試劑： 0.2mol/L K2HPO4、0.2mol/L硼酸、0.2mol/L NaOH、0.1mol/L檸檬酸；1g/L HgCl2，200??g/L鏈霉素，200??g/L青霉素，50g/L石炭酸；或者其它合適的試劑。
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