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產毒真菌的檢測方法

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產毒真菌大部分屬于曲霉菌、青霉菌屬和鐮刀菌屬中的一些種，這些霉菌在自然界分布廣泛，對儲糧、動物飼料和食品侵染的機會較多，通過檢測這些霉菌和毒素反映食品的安全性。
1、材料和試劑
（1）、器材：溫箱（25—28℃）、目鏡測微尺、物鏡測微尺、顯微鏡、超凈工作臺、放大鏡、三角瓶、試管、平皿、酒精燈、載物玻片、蓋玻片等。
（2）、培養(yǎng)基和試劑：察氏培養(yǎng)基、馬鈴薯一葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基、馬鈴薯瓊脂培養(yǎng)基、玉米粉瓊脂培養(yǎng)基、滅菌蒸餾水、乙醇。
2、方法
（1）、采樣采取有代表性的樣品250—500g，盡快檢驗。
（2）、表面除雜菌如為糧粒樣品，取樣品10—20，放入滅菌的150ml三角瓶中，無菌條件下加入無菌水超過樣面1—2cm左右，塞好塞子充分振搖1— 2min；將水倒凈后，再加水振蕩，反復洗滌10次，棄去水后。將糧粒倒于無菌平皿中備用；原糧樣品應先用75%酒精浸泡1—2min，脫去糧粒表面蠟質，傾去酒精后，再用上法洗滌，備用。
（3）、接種與培養(yǎng)：用無菌鑷子將 已處理好的糧粒胚部向下，均勻地插種在高滲察氏平板上（糧粒的一部分插 入培養(yǎng)基中）、，小粒樣品如大米接種10粒/皿，大粒的樣品如玉米、大豆等接種5粒/皿，每份樣品須接種100粒。將種有樣品的平皿置25—28℃孵箱培養(yǎng) 5—7d，培養(yǎng)后期應每天觀察菌落生長情況，以免生長較快的霉菌將其他的菌覆蓋，影響觀察及檢驗結果。
（4）、計數(shù)：記錄100粒糧食中長霉菌的數(shù)量，同時記錄每一粒所生長的霉菌數(shù)，計算霉菌侵染的粒數(shù)和菌落生長的總數(shù)。在計數(shù)時，只計數(shù)與糧粒相連接的菌落。
（5）、鏡檢與初分離：用接種鉤在平皿上鉤取一小塊稍帶少許培養(yǎng)基的培養(yǎng)物，放在已滴加1—2滴乳酸苯酚液的載玻片上，再用兩支接種鉤輕輕地將培養(yǎng)物分開，然后蓋 上蓋玻片，先在低倍鏡下找到培養(yǎng)物。再將顯微鏡的聚光器位置降低，光圈調小，轉至高倍鏡下觀察。如為曲霉屬可見典型的分生孢子頭；青霉屬的真菌鏡下可見有 鑒別意義的帚狀枝；而鐮刀菌屬可見鐮刀狀的大分生孢子等。將它們分別轉種于相應的鑒別培養(yǎng)基平板和斜面，25—28℃孵箱培養(yǎng)5—14d。
（6）、常見產毒霉菌鑒定：霉菌的鑒定主要依靠形態(tài)特征，包括菌落特征和鏡下特征。需觀察的鏡下特征包括霉菌的菌絲和孢子的形態(tài)和特征、孢子的排列等，并詳細記錄。
3、實驗結果
常見真菌菌落特征如下：
（1）、菌落生長的速度：用培養(yǎng)一定天數(shù)的菌落直徑大小來表示霉菌生長的速度，也可用局限生長表示生長速度慢，蔓延生長表示生長速度快。
（2）、菌落的顏色：霉菌菌落的顏色應包括菌落表面的顏色、菌落背面的顏色、菌落周圍培養(yǎng)基的顏色，以及霉菌在不同生長階段的顏色變化。
（3）、菌落的質地：根據(jù)菌絲的長短、疏密以及孢子的有無和多少，菌落的質地可為絨狀、絮狀、繩狀和束狀。
（4）、菌落的表面：疏松或致密，平坦、凹陷或隆起，有無皺褶，有無放射狀或同心環(huán)狀的溝紋，邊緣是否整齊等。
（5）、滲出物：有的菌種常常在菌落表面出現(xiàn)帶顏色的似液體物即為滲出物，記錄其色調和分泌的量。
（6）、氣味：是否出現(xiàn)除霉味以外的其他特殊的氣味。
（7）、菌絲：由孢子在環(huán)境適合情況下長出的芽管延長而成，可長出許多分枝，形成交織成團狀的菌絲體。在顯微鏡下為或粗或細、有隔或無隔的、具分枝的結構。有的皮膚感染的真菌會形成螺旋狀、球拍狀、結節(jié)狀、鹿角狀及梳狀等具鑒別意義的特殊菌絲。但糧食中真菌的菌絲一般無鑒別意義。
（8）、孢子：是真菌的繁殖器官，一條菌絲上可長出多個孢子，當環(huán)境條件適合時，孢子又發(fā)芽發(fā)育成菌絲。根據(jù)產生孢子的方式不同，分為有性孢子和無性孢子兩類。有性孢子有接合孢子、卵孢子、擔孢子和子囊孢子；無性孢子有分生孢子、孢子囊孢子、葉狀孢子（包括芽生孢子、厚膜孢子和關節(jié)孢子）、。在產毒霉菌鑒定中后者更有意義。

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