將操作中各個環(huán)節(jié)常出現(xiàn)問題的原因及解決辦法總結(jié)于下，ELISA試劑盒以期給同行帶來一些啟發(fā)，提高試驗質(zhì)量。以靈敏度較高、特異性較好的特點在得到了廣泛的應(yīng)用，但操作中的各個環(huán)節(jié)對試驗的檢測效果影響較大，如不注意，有可能導(dǎo)致顯色不全、花板等結(jié)果。

下面分析Elisa試驗操作中可能影響結(jié)果的原因，并給出相應(yīng)的解決辦法

一、選擇試劑

選擇質(zhì)量優(yōu)良的檢測試劑，嚴格按照試劑說明書進行操作，操作前將試劑在室溫下平衡30-60分鐘。

二、加樣

可能原因：

1)血清或血漿標本分離不好即進行加樣; 2)手工操作中，加樣板過多造成加樣后放入孵箱前等待時間過長(特別是室內(nèi)溫度較高時); 3)加完標本再加酶試劑時酶濺出孔外。

解決辦法：

1，標本為血清：將血液先自然存放1-2小時后，再用3000rmp離心15分鐘;標本為血漿：必須使用含抗凝劑的血液標本收集管，采血后必須立即顛倒采血管混合5-10次，放置一段時間后，3000rpm離心15分鐘;若在幾天內(nèi)檢測，可放在2-8℃冰箱中，若要貯存，則置于-20℃的低溫冰箱內(nèi)。
2，加樣后及時放入孵箱。
3，加酶試劑后用吸水紙在酶標板表面輕拭吸干。
4，如果采用AT或其他全自動加樣，選擇FAME或其他后處理儀器加酶試劑。
5，ELISA試劑盒標本較多時，請分批操作。

三、 孵育

可能原因：

1，孵育時未貼封片或加蓋，使標本或稀釋液蒸發(fā)，吸附于孔壁，難于清洗che底;
2，孵育時間人為延長，導(dǎo)致非特異性結(jié)合緊附于反應(yīng)孔周圍，難以清洗che底。

解決辦法：

1，貼封片或加蓋;
2，按說明步驟嚴格控制操作時間。

四、洗板

可能原因：

1，采用手工洗板，孔與孔之間液體交叉。
2，采用半自動洗板機洗板時，洗液量不足，導(dǎo)致洗板不che底;洗板針堵塞，抽吸不wan全;洗板不暢，導(dǎo)致洗板效果差。
3，反應(yīng)板過多造成洗板等待時間長。

解決辦法：

1，ELISA試劑盒保證洗液注滿各孔，洗板針暢通，洗完板后zui hao在吸水紙(選擇干凈、無或少塵的吸水材料)上輕輕拍干;
2，合理安排，或多用幾臺洗板機。

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