對于很多生物研究者來說，培養(yǎng)細胞系重要的一點是，在培養(yǎng)的過程中一定要注意細胞的污染，一般來說，細胞污染不可避免，但可以減少其發(fā)生的頻率和后果的嚴重性，所以在培養(yǎng)細胞的過程中一定要注意細胞培養(yǎng)的環(huán)境。那造成細胞污染都存在哪些方面的因素以及應(yīng)該注意哪些操作事項呢？

細胞污染根據(jù)污染源主要可以分為化學(xué)性，物理性和生物性污染。

化學(xué)性污染

培養(yǎng)環(huán)境中許多化學(xué)物質(zhì)都可以引起細胞的污染?；瘜W(xué)物質(zhì)并不總是抑制細胞的生長，某些化學(xué)物質(zhì)如激素就可促進細胞的生長。不同細胞對化學(xué)物質(zhì)污染的反應(yīng)是不一樣的。未純化的物質(zhì)、試劑、水、血清、生長輔助因子及儲存試劑的容器都可能成為化學(xué)性污染的來源。細胞培養(yǎng)的必需養(yǎng)分，如氨基酸，若濃度超過了合適的范圍，也會對細胞產(chǎn)生毒性。

同樣，不同細胞系其佳培養(yǎng)條件下對血清和緩沖液的要求是不一樣的，在培養(yǎng)中應(yīng)嚴格控制。玻璃制品清洗過程中殘留的變性劑或肥皂(通常殘留在瓶蓋的內(nèi)表面)是常見的化學(xué)性污染。為了避免金屬離子、有機分子、細胞內(nèi)毒素等物質(zhì)對水的污染，在配制液體，清洗容器時必須使用不含雜質(zhì)的超純水。

動物血清是細胞培養(yǎng)中常用的天然培養(yǎng)基，但血清又是潛在的生物及化學(xué)污染的來源。由于血清采集于多個動物，而且不同廠商的生產(chǎn)工藝及質(zhì)量各不相同，因此血清中許多成分的濃度存在很大的變異。血清對不同細胞的促生長能力及毒副作用取決于這些細胞的分化功能、組織來源及培養(yǎng)基的成分等因素。在進行一系列實驗時，為了保證實驗的可重復(fù)性，好選用同一批次的血清。

細胞系培養(yǎng)使用的所有物質(zhì)都應(yīng)是高純度的，并經(jīng)過機構(gòu)的鑒定，實驗者應(yīng)對上述成分進行純度鑒定。同時，正確配置和儲存培養(yǎng)液及試劑也是非常重要的，應(yīng)該采取標(biāo)準的操作步驟，避免液體體積計算錯誤，混用類似化合物等錯誤。

物理性污染

物理性污染常常被人們所忽視或被籠統(tǒng)地歸為化學(xué)性污染。物理性污染通過影響細胞培養(yǎng)體系中的生化成分，從而影響細胞的代謝。培養(yǎng)環(huán)境中的物理因素，如溫 度、放射線、振動、輻射(紫外線或熒光)會對細胞產(chǎn)生影響。

細胞、培養(yǎng)液或其它培養(yǎng)試劑暴露于放射線、輻射或過冷過熱的溫度中，可以引起細胞代謝發(fā)生改變，如細胞同步化、細胞生長受抑制甚至細胞死亡。通過實驗室的合理設(shè)計及建立規(guī)范的操作規(guī)程，可以減少環(huán)境中物理因素對細胞的影響。孵箱應(yīng)放在溫度較恒定的環(huán)境中，周圍不能放置能引起機械振動的設(shè)備，如離心機。

培養(yǎng)液及培養(yǎng)試劑應(yīng)放在固定的位置，為避免光照試劑不能放在玻璃門的冰箱中，試劑周圍不能放同位素。培養(yǎng)液從冰箱中取出后應(yīng)在室溫中放置一段時間后再進行實驗，以避免過冷的溫度對細胞的影響。

微生物污染

由于體外培養(yǎng)的細胞自身沒有抵抗污染的能力，細胞系而在培養(yǎng)基中加抗生素的抗污染能力也是有限的，因而細胞微生物污染一旦發(fā)生往往是無法挽救的。一般在細胞受到污染早期或污染較輕時，能及時處理并除去污染物，部分細胞還有可能得到挽救。

不同的微生物污染物對細胞的影響也有差別，微生物中支原體和病毒對細胞形態(tài)和技能的影響是長期的，緩慢的和潛在的。而霉菌和細菌增殖迅速，能在很短的時間內(nèi)抑制細胞生長或產(chǎn)生有毒物質(zhì)殺滅細胞。

霉菌污染

種類很多，污染的多是曲霉菌，白色念珠菌，酵母菌，黑霉菌，孢子菌等。霉菌污染后多數(shù)在培養(yǎng)液中形成淡或是白色的漂浮物，一般肉眼可見，較易被發(fā)現(xiàn)，短期內(nèi)培養(yǎng)液多不變混濁。

倒置顯微鏡下可以看見細胞之間有縱橫交錯穿行的絲狀，樹枝狀或管狀菌絲，并漂浮在培養(yǎng)液中。很多菌絲在高倍鏡下可以看見鏈狀排列的菌株。念珠菌及酵母菌菌株呈卵圓形，散在細胞上及細胞周邊生長。

處理：確認是霉菌污染，如果細胞種類不是特別珍貴，直接放棄，并將實驗環(huán)節(jié)消毒。

細菌污染

細菌污染較常見的有大腸桿菌，白色葡萄球菌，假單孢菌等。加用抗菌素的培養(yǎng)液可預(yù)防和排除個別一般少量細菌的污染。一旦發(fā)生細菌污染很容易發(fā)現(xiàn)，多數(shù)情況下培養(yǎng)液短時間內(nèi)變黃，表明有大量酸性物質(zhì)產(chǎn)生，出現(xiàn)明顯渾濁現(xiàn)象；有時靜置的培養(yǎng)液起初不混，但稍加震蕩，就有許多混濁物漂起。

倒置顯微鏡下觀察，可見培養(yǎng)液中有大量圓球狀顆粒物漂浮，有時在細胞表面及周圍有大量細菌存在，細胞停止生長并有中毒表現(xiàn)。必要時可取少量培養(yǎng)液涂片染色檢查以明確細菌種類；有的培養(yǎng)液改變不明顯而有疑似污染，亦可向肉湯培養(yǎng)基內(nèi)地入少量培養(yǎng)液，37℃培養(yǎng)以檢測。

處理：一般用抗生素的常用量的5~10倍作沖擊療法，用藥24~48小時后再換常規(guī)培養(yǎng)液，有時在早期污染時此法有效。細胞培養(yǎng)中用抗生素多為預(yù)防細菌污染，一半多聯(lián)合應(yīng)用。有的抗生素只有抑菌作用而無殺菌效應(yīng)。

支原體污染

支原體是一種大小介于細菌和病毒之間(小直徑0.2um)并獨立生活的微生物．約有1%可通過濾菌器。支原體無細胞壁形態(tài)呈高度多形性．可為圓形、絲狀或梨形。

原體形態(tài)多變，細胞系在光境下不易看清內(nèi)部結(jié)構(gòu)。多數(shù)支原體適合于偏堿條件下生存(PH7.6-8.0)，對酸耐受性差。對熱比較敏感，對一般抗生素不敏感。

支原體污染細胞后．培養(yǎng)液可不發(fā)生混濁．多數(shù)情況下細胞病理變化輕微或不顯著，細微變化也可由于傳代、換液而緩解．因此易被忽視。但個別嚴重者，可致細胞增殖緩慢．甚至從培養(yǎng)器皿脫落。

以上是上海紀寧實業(yè)細胞污染的分類及注意事項，僅供體外研究使用，不用于臨床診斷