接觸ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)多年，ELISA試劑盒操作過(guò)程復(fù)雜，從樣本收集，實(shí)驗(yàn)操作，加樣，洗滌，孵化都有很多注意事項(xiàng)，稍有不慎，將導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)失敗，本章將就ELISA試劑盒操作過(guò)程中的問(wèn)題，與大家一起探討。

(1)嚴(yán)格按照試劑說(shuō)明書(shū)進(jìn)行操作。操作前將試劑在室溫下平衡30～60min。

(2)加樣后及時(shí)放人孵箱。標(biāo)本較多時(shí)，要分批操作。按說(shuō)明步驟嚴(yán)格控制操作時(shí)間，防止孵育時(shí)間人為延長(zhǎng)，導(dǎo)致非特異性結(jié)合緊附于反應(yīng)孔周圍，難以清洗*。

(3)封板溫育時(shí)，各孔一定要封嚴(yán)，防止陽(yáng)性標(biāo)本的液體蒸發(fā)，產(chǎn)生周邊現(xiàn)象從而導(dǎo)致“花板"的出現(xiàn)。

(4)用洗板機(jī)洗板時(shí)，保證洗液注滿各孔，洗板針暢通，洗完板后在吸水紙(選擇干凈、無(wú)或少塵的吸水材料)上輕輕拍干：還要防止針口有纖維蛋白或異物，這些異物在洗板的過(guò)程中易產(chǎn)生拖帶現(xiàn)象而導(dǎo)致“花板"的出現(xiàn)。

(5)合理安排檢測(cè)量，以免反應(yīng)板過(guò)多造成洗板等待時(shí)間長(zhǎng)。

(6)加酶試劑后用吸水紙?jiān)诿笜?biāo)板表面輕拭吸干。

(7)顯色劑盡量在臨用前配制，堅(jiān)持不用過(guò)期顯色劑，肉眼可見(jiàn)淺藍(lán)色的TMB顯色劑不用。

(8)加樣時(shí)保持顯色劑不外流;A、B液應(yīng)避免接觸金屬器械。加終止液時(shí)應(yīng)避免產(chǎn)生氣泡。

(9)應(yīng)保證C清潔，整個(gè)操作過(guò)程中保證酶標(biāo)板不接觸次氯酸。

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