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因此含雜質(zhì)較多的抗原也可選用捕獲包被法,試驗(yàn)的特異性、敏感性均由此得以改善,重復(fù)性亦佳。蛋白質(zhì)與聚苯乙烯固相載體是通過物理吸附聯(lián)絡(luò)的,靠的是蛋白質(zhì)分子結(jié)構(gòu)上的疏水基團(tuán)與固相載體表面的疏水基團(tuán)間的效果于。可將聚苯乙烯板先經(jīng)紫外線照射(例如30W紫外燈,75cm照射12小時(shí)),以增加其吸附功能。
下面要為您介紹的是ELISA試劑盒的具體操作方法:
1、洗滌液:用前配制,有的試劑盒會(huì)標(biāo)明,配好的4度下一般可以放一個(gè)月,如果沒有標(biāo)明,盡量用新鮮的,不要多配制。
2、顯色液(有A液和B液的),用前15分鐘配制。
3、標(biāo)準(zhǔn)品:有的試劑盒中標(biāo)準(zhǔn)品是已經(jīng)配制好的,4度保存,有的是要現(xiàn)配制的,按照說明書操作;
4、濃縮結(jié)合的二抗和HRP:如果需要配制,試劑盒沒注明配好可以保存多久的話,盡量現(xiàn)配現(xiàn)用(用前15分鐘配制);原則是試劑盒上沒有指出配制物的儲(chǔ)藏方式的話,應(yīng)該現(xiàn)配現(xiàn)用;不要怕麻煩;還有小瓶的管子開蓋前要離心,以免蓋子上粘連以后總量不夠。
5、加樣:室溫溫育的ELISA試劑盒,特別是溫育時(shí)間比較短的實(shí)驗(yàn)操作的試劑,加樣對(duì)數(shù)據(jù)的影響比較大,特別要注意加樣問題。
不好的操作原因:不會(huì)正確使用加樣器,血清或血漿標(biāo)本分離不好即進(jìn)行加樣;手工操作中,加樣板過多造成加樣后放入孵箱前等待時(shí)間過長(zhǎng)(特別是室內(nèi)溫度較高時(shí));加完標(biāo)本再加酶試劑時(shí)酶濺出孔外。
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