首先將具有專一性之抗體包被（coating）于酶標(biāo)板上，ELISA試劑盒檢測時加入待測樣本，樣本中若含有待測抗原，則會與酶標(biāo)板上包被的抗體專一性結(jié)合，然后加入另一種針對待檢抗原的抗體，通常稱為檢測抗體，包被抗體和檢測抗體將抗原夾在中間所以叫雙抗夾心。ELISA試劑盒檢測抗體通常帶有HRP酶標(biāo)記，接著加入HRP酶的底物TMB，TMB被酶催化發(fā)生顏色反應(yīng)，樣本中抗原量越多則顯色越深。

      因此當(dāng)樣本中抗原的量越多，則HRP酶標(biāo)記抗原可結(jié)合的包被抗體就越少，兩種抗原競爭結(jié)合包被抗體，所以稱為競爭法。接著加入HRP酶的底物TMB，TMB被酶催化發(fā)生顏色反應(yīng)，當(dāng)樣本中抗原量越多，代表酶標(biāo)板孔內(nèi)留下的HRP標(biāo)記抗原越少，顯色也就越淺。百特純大分子Meretciel的測激素的ELISA試劑盒有些就是競爭法的。將針對小分子抗原的抗體包被在酶標(biāo)板上，ELISA試劑盒檢測時加入待測樣本，使樣本中的待測抗原與酶標(biāo)板上的抗體結(jié)合。然后加入HRP酶標(biāo)記的抗原，此抗原也可與酶標(biāo)板上的抗體結(jié)合，由于酶標(biāo)板上固著的抗體數(shù)量有限，

1、檢測范圍不同

競爭法一般用于檢測無法同時與兩種抗體結(jié)合的小分子抗原；ELISA試劑盒夾心法適用于測定二價或二價以上的大分子抗原，但不適用于測定半抗原及小分子單價抗原，因其不能形成兩位點夾心。

2、檢測原理不同

競爭法的檢測原理為：受檢抗原和酶標(biāo)抗原競爭與固相抗體結(jié)合，因此結(jié)合于固相的酶標(biāo)抗原量與受檢抗原的量呈反比。