人抗核抗體ELISA檢測試劑盒
　　
　　本試劑僅供研究使用標(biāo)本：血清或血漿
　　
　　試驗原理：
　　
　　ANA試劑盒是間接法酶聯(lián)免疫吸附實驗（ELISA）.已知ANA濃度的標(biāo)準(zhǔn)品、未知濃度的樣品加入微孔酶標(biāo)板內(nèi)進(jìn)行檢測。先將ANA和生物素標(biāo)記的抗體同時溫育。洗滌后，加入親和素標(biāo)記過的HRP。再經(jīng)過溫育和洗滌，去除未結(jié)合的酶結(jié)合物，然后加入底物A、B，和酶結(jié)合物同時作用。產(chǎn)生顏色。顏色的深淺和樣品中ANA的濃度呈比例關(guān)系。
　　
　　自備材料
　　
　　蒸餾水。
　　
　　加樣器：5ul、10ul、50ul、100ul、200、500ul、1000ul。
　　
　　振蕩器及磁力攪拌器等。
　　
　　安全性
　　
　　避免直接接觸終止液和底物A、B。一旦接觸到這些液體，請盡快用水沖洗。
　　
　　實驗中不要吃喝、抽煙或使用化妝品。
　　
　　不要用嘴吸取試劑盒里的任何成份。
　　
　　人抗核抗體ELISA檢測試劑盒
　　
　　操作注意事項
　　
　　試劑應(yīng)按標(biāo)簽說明書儲存，使用前恢復(fù)到室溫。稀稀過后的標(biāo)準(zhǔn)品應(yīng)丟棄，不可保存。
　　
　　實驗中不用的板條應(yīng)立即放回包裝袋中，密封保存，以免變質(zhì)。
　　
　　不用的其它試劑應(yīng)包裝好或蓋好。不同批號的試劑不要混用。保質(zhì)前使用。
　　
　　使用一次性的吸頭以免交叉污染，吸取終止液和底物A、B液時，避免使用帶金屬部分的加樣器。
　　
　　使用干凈的塑料容器配置洗滌液。使用前充分混勻試劑盒里的各種成份及樣品。
　　
　　洗滌酶標(biāo)板時應(yīng)充分拍干，不要將吸水紙直接放入酶標(biāo)反應(yīng)孔中吸水。
　　
　　底物A應(yīng)揮發(fā)，避免長時間打開蓋子。底物B對光敏感，避免長時間暴露于光下。避免用手接觸，有毒。實驗完成后應(yīng)立即讀取OD值。
　　
　　加入試劑的順序應(yīng)一致，以保證所有反應(yīng)板孔溫育的時間一樣。
　　
　　按照說明書中標(biāo)明的時間、加液的量及順序進(jìn)行溫育操作。
　　
　　樣品收集、處理及保存方法
　　
　　血清-----操作過程中避免任何細(xì)胞刺激。使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管。收集血液后，1000×g離心10分鐘將血清和紅細(xì)胞迅速小心地分離。
　　
　　血漿-----EDTA、檸檬酸鹽、肝素血漿可用于檢測。1000×g離心30分鐘去除顆粒。
　　
　　細(xì)胞上清液---1000×g離心10分鐘去除顆粒和聚合物。
　　
　　保存------如果樣品不立即使用，應(yīng)將其分成小部分-70℃保存，避免反復(fù)冷凍。盡可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中大量顆粒，檢測前先離心或過濾。不要在37℃或更高的溫度加熱解凍。應(yīng)在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。
　　
　　人抗核抗體ELISA檢測試劑盒
　　
　　操作步驟
　　
　　使用前，將所有試劑充分混勻。不要使液體產(chǎn)生大量的泡沫，以免加樣時加入大量的氣泡，產(chǎn)生加樣上的誤差。
　　
　　根據(jù)待測樣品數(shù)量加上標(biāo)準(zhǔn)品的數(shù)量決定所需的板條數(shù)。每個標(biāo)準(zhǔn)品和空白孔建議做復(fù)孔。每個樣品根據(jù)自己的數(shù)量來定，能使用復(fù)孔的盡量做復(fù)孔。
　　
　　加入稀釋好后的標(biāo)準(zhǔn)品50ul于反應(yīng)孔、加入待測樣品50ul于反應(yīng)孔內(nèi)。立即加入50ul的生物素標(biāo)記的抗體。蓋上膜板，輕輕振蕩混勻，37℃溫育1小時。
　　
　　甩去孔內(nèi)液體，每孔加滿洗滌液，振蕩30秒，甩去洗滌液，用吸水紙拍干。重復(fù)此操作3次。如果用洗板機(jī)洗滌，洗滌次數(shù)增加一次。
　　
　　每孔加入80ul的親和鏈酶素-HRP，輕輕振蕩混勻，37℃溫育30分鐘。
　　
　　甩去孔內(nèi)液體，每孔加滿洗滌液，振蕩30秒，甩去洗滌液，用吸水紙拍干。重復(fù)此操作3次。如果用洗板機(jī)洗滌，洗滌次數(shù)增加一次。
　　
　　每孔加入底物A、B各50ul，輕輕振蕩混勻，37℃溫育10分鐘。避免光照。
　　
　　取出酶標(biāo)板，迅速加入50ul終止液，加入終止液后應(yīng)立即測定結(jié)果。
　　
　　在450nm波長處測定各孔的OD值。
　　
　　6號標(biāo)準(zhǔn)品以上的結(jié)果為非線性的，根據(jù)此標(biāo)準(zhǔn)曲線無法得到的結(jié)果。
　　
　　試劑盒性能
　　
　　1.靈敏度：zui小的檢測濃度小于1號標(biāo)準(zhǔn)品。稀釋度的線性。樣品線性回歸與預(yù)期濃度相關(guān)系數(shù)R值為0.990。
　　
　　2.特異性：不與人其它細(xì)胞因子反應(yīng)。
　　
　　3.重復(fù)性：板內(nèi)、板間變異系數(shù)均小于10%。
　　
　　人抗核抗體ELISA檢測試劑盒
　　
　　結(jié)果判斷與分析
　　
　　1、儀器值：于波長450nm的酶標(biāo)儀上讀取各孔的OD值
　　
　　2、以吸光度OD值為縱坐標(biāo)（Y），相應(yīng)的ANA標(biāo)準(zhǔn)品濃度為橫坐標(biāo)（X），做得相應(yīng)的曲線，樣品的ANA含量可根據(jù)其OD值由標(biāo)準(zhǔn)曲線換算出相應(yīng)的濃度。
　　
　　3、檢測值范圍：0-8.0IU/ml
　　
　　4、敏感度：0.01IU/ml
　　
　　Phenolred,sodiumsalt酚紅鈉鹽[34487-61-1]25g
　　
　　Phenolred,sodiumsalt酚紅鈉鹽[34487-61-1]100g
　　
　　Phenosafranine酚番紅花紅[81-93-6]10g
　　
　　Phenol-4-sulfonicacidsolution（33%）苯酚磺酸33%溶液[98-67-9]100ml
　　
　　Phenoxyacetiacid苯氧乙酸[122-59-8]25g
　　
　　9-Phenyl-3-fluorone苯基熒光酮[975-17-7]10g
　　
　　Phleomycin腐草霉素[11006-33-0]25mg
　　
　　Phenothiazine吩噻嗪[92-84-2]25g
　　
　　Phenoxyacetiacidsodiumsalt苯氧乙酸鈉[3598-16-1]100g
　　
　　D-PhenylalanineD-苯丙氨酸[673-06-3]5g
　　
　　DL-PhenylalanineDL-苯丙氨酸[150-30-1]25g
　　
　　DL-beta-PhenylalanineDL-beta-苯丙氨酸[614-19-7]100g
　　
　　L-PhenylalanineL-苯丙氨酸[63-91-2]100g
　　
　　L-PhenylalanineL-苯丙氨酸[63-91-2]500g
　　
　　L-PhenylalanineL-苯丙氨酸[63-91-2]25g
　　
　　L-PhenylalanineL-苯丙氨酸[63-91-2]100g
　　
　　N-PhenylanthranilicacidN-苯基鄰氨基苯甲酸[91-40-7]25g
　　
　　4-Phenyl-3-buten-2-one苯丁烯酮[122-57-6]100g
　　
　　m-Phenylenediamine間苯二胺[108-45-2]100g
　　
　　m-Phenylenediaminedihydrochloride間苯二胺鹽酸鹽[541-69-5]25g
　　
　　Polyvinylacetate聚乙烯乙酸酯[9003-20-7]250g
　　
　　Ponceau2R麗春紅2R[3761-53-3]10g
　　
　　PonceauS麗春紅S[6226-79-5]25g
　　
　　o-Phenylenediamine鄰苯二胺[95-54-5]100g
　　
　　o-Phenylenediamine鄰苯二胺[95-54-5]25g
　　
　　o-PhenylenediamineTablet鄰苯二胺片劑[95-54-5]5Tablets
　　
　　o-Phenylenediaminehydrochloride鄰苯二胺鹽酸鹽[615-28-1]100g
　　
　　p-Phenylenediamine對苯二胺[106-50-3]100g
　　
　　p-Phenylenediaminedihydrochloride對苯二胺鹽酸鹽[624-18-0]25g
　　
　　2-Phenylethanol2-苯乙醇[60-12-8]100ml
　　
　　DL-alpha-PhenylglycineDL-苯甘氨酸[2835-06-5]25g
　　
　　（R）-（-）-2-PhenylglycinolD-苯甘氨醇[56613-80-0]25g
　　
　　Phenylhydrazine苯肼[100-63-0]100ml
　　
　　Phenylhydrazinehydrochloride鹽酸苯肼[59-88-1]25g
　　
　　3-Phenylpropionicacid3-苯丙酸[501-52-0]25g
　　
　　1-Phenyl-3-pyrazolidone菲尼酮[92-43-3]100g
　　
　　RhodamineB羅丹明B[81-88-9]25g
　　
　　RhodamineB羅丹明B[81-88-9]100g
　　
　　Phenylsalicylate水楊酸苯酯[118-55-8]250g
　　
　　1-Phenyl-1H-tetrazole-5-thiol1-苯基-5-巰基四氮唑[86-93-1]100g
　　
　　N-PhenylureaN-苯基脲[64-10-8]25g
　　
　　5-Phenylvalericacid5-苯基戊酸[2270-20-4]25g
　　
　　Phloroglucinol,dihydrate1,3,5-三羥基苯二水合物[108-73-6]25g
　　
　　Phloroglucinol,dihydrate1,3,5-三羥基苯二水合物[108-73-6]100g
　　
　　Phorbol12-myristate13-acetate佛波醇[16561-29-8]1mg