人熱休克蛋白-60ELISA 檢測(cè)試劑盒　　　　　　　　　　　　

本試劑僅供研究使用  標(biāo)本：血清或血漿

試驗(yàn)原理：
　　　　HSP-60試劑盒是固相夾心法酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)（ELISA）.已知HSP-60濃度的標(biāo)準(zhǔn)品、未知濃度的樣品加入微孔酶標(biāo)板內(nèi)進(jìn)行檢測(cè)。先將HSP-60和生物素標(biāo)記的抗體同時(shí)溫育。洗滌后，加入親和素標(biāo)記過(guò)的HRP。再經(jīng)過(guò)溫育和洗滌，去除未結(jié)合的酶結(jié)合物，然后加入底物A、B，和酶結(jié)合物同時(shí)作用。產(chǎn)生顏色。顏色的深淺和樣品中HSP-60的濃度呈比例關(guān)系。

自備材料
蒸餾水。
加樣器：5ul、10ul、50ul、100ul、200、500ul、1000ul。
振蕩器及磁力攪拌器等。

安全性
避免直接接觸終止液和底物A、B。一旦接觸到這些液體，請(qǐng)盡快用水沖洗。
實(shí)驗(yàn)中不要吃喝、抽煙或使用化妝品。
不要用嘴吸取試劑盒里的任何成份。

人熱休克蛋白-60ELISA 檢測(cè)試劑盒

操作注意事項(xiàng)
試劑應(yīng)按標(biāo)簽說(shuō)明書儲(chǔ)存，使用前恢復(fù)到室溫。稀稀過(guò)后的標(biāo)準(zhǔn)品應(yīng)丟棄，不可保存。
實(shí)驗(yàn)中不用的板條應(yīng)立即放回包裝袋中，密封保存，以免變質(zhì)。
不用的其它試劑應(yīng)包裝好或蓋好。不同批號(hào)的試劑不要混用。保質(zhì)前使用。
使用一次性的吸頭以免交叉污染，吸取終止液和底物A、B液時(shí)，避免使用帶金屬部分的加樣器。
使用干凈的塑料容器配置洗滌液。使用前充分混勻試劑盒里的各種成份及樣品。
洗滌酶標(biāo)板時(shí)應(yīng)充分拍干，不要將吸水紙直接放入酶標(biāo)反應(yīng)孔中吸水。
底物A應(yīng)揮發(fā)，避免長(zhǎng)時(shí)間打開蓋子。底物B對(duì)光敏感，避免長(zhǎng)時(shí)間暴露于光下。避免用手接觸，有毒。實(shí)驗(yàn)完成后應(yīng)立即讀取OD值。
加入試劑的順序應(yīng)一致，以保證所有反應(yīng)板孔溫育的時(shí)間一樣。
按照說(shuō)明書中標(biāo)明的時(shí)間、加液的量及順序進(jìn)行溫育操作。

樣品收集、處理及保存方法
血清-----操作過(guò)程中避免任何細(xì)胞刺激。使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管。收集血液后，1000×g離心10分鐘將血清和紅細(xì)胞迅速小心地分離。
血漿-----EDTA、檸檬酸鹽、肝素血漿可用于檢測(cè)。1000×g離心30分鐘去除顆粒。
細(xì)胞上清液---1000×g離心10分鐘去除顆粒和聚合物。
保存------如果樣品不立即使用，應(yīng)將其分成小部分-70 ℃保存，避免反復(fù)冷凍。盡可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中大量顆粒，檢測(cè)前先離心或過(guò)濾。不要在37℃或更高的溫度加熱解凍。應(yīng)在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。

洗滌緩沖液（50×）的稀釋：蒸餾水50倍稀釋。

人熱休克蛋白-60ELISA 檢測(cè)試劑盒

操作步驟
使用前，將所有試劑充分混勻。不要使液體產(chǎn)生大量的泡沫，以免加樣時(shí)加入大量的氣泡，產(chǎn)生加樣上的誤差。
根據(jù)待測(cè)樣品數(shù)量加上標(biāo)準(zhǔn)品的數(shù)量決定所需的板條數(shù)。每個(gè)標(biāo)準(zhǔn)品和空白孔建議做復(fù)孔。每個(gè)樣品根據(jù)自己的數(shù)量來(lái)定，能使用復(fù)孔的盡量做復(fù)孔。
加入稀釋好后的標(biāo)準(zhǔn)品50ul于反應(yīng)孔、加入待測(cè)樣品50ul于反應(yīng)孔內(nèi)。立即加入50ul的生物素標(biāo)記的抗體。蓋上膜板，輕輕振蕩混勻，37℃溫育1小時(shí)。
甩去孔內(nèi)液體，每孔加滿洗滌液，振蕩30秒，甩去洗滌液，用吸水紙拍干。重復(fù)此操作3次。如果用洗板機(jī)洗滌，洗滌次數(shù)增加一次。
每孔加入80ul的親和鏈酶素-HRP，輕輕振蕩混勻，37℃溫育30分鐘。
甩去孔內(nèi)液體，每孔加滿洗滌液，振蕩30秒，甩去洗滌液，用吸水紙拍干。重復(fù)此操作3次。如果用洗板機(jī)洗滌，洗滌次數(shù)增加一次。
每孔加入底物A、B各50ul，輕輕振蕩混勻，37℃溫育10分鐘。避免光照。
取出酶標(biāo)板，迅速加入50ul終止液，加入終止液后應(yīng)立即測(cè)定結(jié)果。
在450nm波長(zhǎng)處測(cè)定各孔的OD值。

6號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品以上的結(jié)果為非線性的，根據(jù)此標(biāo)準(zhǔn)曲線無(wú)法得到的結(jié)果。

試劑盒性能
1. 靈敏度：zui小的檢測(cè)濃度小于1號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品。稀釋度的線性。樣品線性回歸與預(yù)期濃度相關(guān)系數(shù)R值為0.990。
2. 特異性：不與人其它細(xì)胞因子反應(yīng)。
3. 重復(fù)性：板內(nèi)、板間變異系數(shù)均小于10%。

人熱休克蛋白-60ELISA 檢測(cè)試劑盒

結(jié) 果 判 斷 與 分 析
1、儀器值：于波長(zhǎng)450nm的酶標(biāo)儀上讀取各孔的OD值

2、以吸光度OD值為縱坐標(biāo)（Y），相應(yīng)的HSP-60標(biāo)準(zhǔn)品濃度為橫坐標(biāo)（X），做得相應(yīng)的曲線，樣品的HSP-60含量可根據(jù)其OD值由標(biāo)準(zhǔn)曲線換算出相應(yīng)的濃度。

3、檢測(cè)值范圍：0-80ng/ml

4、敏感度： 0.1 ng/ml

n-Heptyl β-D-glucopyranoside 正庚基-beta-D-吡喃葡萄糖苷 [78617-12-6] 1g
Hesperidin 橙皮甙 [520-26-3] 50mg
Hexachloroethane 六氯乙烷 [67-72-1] 250g
1-Hexadecanoic acid 十六酸 [57-10-3] 250g
1-Hexadecanol 十六醇 [36653-82-4] 1kg
Hexadecyl dimethyl benzyl ammonium chloride N-十六烷基-N,N-二甲基芐基氯化銨 [122-18-9] 25g
Hexadecyl dimethyl benzyl ammonium chloride N-十六烷基-N,N-二甲基芐基氯化銨 [122-18-9] 100g
Hexamethylenetetramine 六次甲基四胺 [100-97-0] 500g
Hexamethylphosphoramide 六甲基磷酰三胺 [680-31-9] 100g
Hexammine cobalt（III） chloride 三氯六氨絡(luò)鈷 [10534-89-1] 1g
Hexammine cobalt（III） chloride 三氯六氨絡(luò)鈷 [10534-89-1] 5g
1,6-Hexanediamine 1,6-己二胺 [124-09-4] 500g
1,6-Hexanediol 1,6-己二醇 [629-11-8] 100g
1-Hexanesulfonic acid, sodium salt 1-已烷磺酸鈉 [2832-45-3] 5g
n-Hexanol 正己醇 [111-27-3] 5ml
Hexokinase （Grade I） 己糖激酶 [9001-51-8] 500U
Hexylene glycol 己二醇 [107-41-5] 500ml
Hexyl-beta-D-maltoside 正己基--beta-D-麥牙糖苷 [870287-95-9] 1g
Hippuric acid 馬尿酸 [495-69-2] 25g
Histamine 組胺 [51-45-6] 1g
Histamine 組胺 [51-45-6] 5g
Histamine dihydrochloride 二鹽酸組胺 [56-92-8] 5g
Histamine dihydrochloride 二鹽酸組胺 [56-92-8] 25g
Histamine diphosphate 二磷酸組胺 [51-74-1] 5g
Histamine diphosphate 二磷酸組胺 [51-74-1] 25g
DL-Histidine DL-組氨酸 [4998-57-6] 50g
L-Histidine, hydrochloride L-組氨酸鹽酸鹽 [645-35-2] 100g
L-Histidine, hydrochloride L-組氨酸鹽酸鹽 [645-35-2] 500g
L-Histidine, monohydrochloride, monohydrate L-組氨酸一鹽酸鹽 一水 [5934-29-2] 25g
L-Histidine, monohydrochloride, monohydrate L-組氨酸一鹽酸鹽 一水 [5934-29-2] 100g
Histochoice® mounting media 組織切片清除劑 / 100ml