[實(shí)驗(yàn)原理]

補(bǔ)體能使抗體致民敏的羊紅細(xì)胞發(fā)生溶血反應(yīng),根據(jù)溶血程度可測(cè)定補(bǔ)體總活性。以溶血百分率作縱坐標(biāo),相應(yīng)的血清補(bǔ)體量為橫坐標(biāo)繪圖,可知在50%溶血附近補(bǔ)體的量與溶血的程度呈直線關(guān)系。因此以50%溶血作為終點(diǎn)較以100%溶血作為終點(diǎn)更為敏感。故稱為50%溶血試驗(yàn),即CH50(50%complement hemolysis)。產(chǎn)生50%溶血所需補(bǔ)體的量為一個(gè)CH50單位。

[實(shí)驗(yàn)材料]

待測(cè)患者血清

5%綿羊紅細(xì)胞懸液

3μ/0.1ml溶血素

PH7.2巴比妥緩沖液或生理鹽水

370C水浴箱、小試管、吸管等

[實(shí)驗(yàn)方法]

取小試管8支,依次編號(hào)；

1-6管加入巴比妥緩沖液0.2ml；

于第1管加入待測(cè)血清0.2ml,混勻后吸出0.2ml加入第2管 …… 依次對(duì)倍稀釋至第6管,從第6管吸取0.2ml棄去,此時(shí)各管血清稀釋度依次為1/2、1/4 、 1/8……1/64 ；

1-6 管加入巴比妥緩沖液 0.2ml,第7管加0.4ml,第8管加0.5ml ，

1-7加溶血素0.1ml ；

每管各加綿羊紅細(xì)胞 0.1ml,輕輕搖勻,置370 C水浴箱30分鐘,40C 冰箱過(guò)夜。

血清總補(bǔ)體活性測(cè)定操作表 單位： ml

6為實(shí)驗(yàn)測(cè)定管；第7管為溶血素對(duì)照管；第8管為綿羊紅細(xì)胞對(duì)照管

50% 標(biāo)準(zhǔn)溶血管的配置：

取5%綿羊紅細(xì)胞1ml,離心后棄上清,加入蒸餾水0.5ml,使紅細(xì)胞全部溶解,再加雙倍(1.7%)生理鹽水0.5ml,混勻后加5%綿羊紅細(xì)胞1ml?；靹蛉〈艘?0.1ml加巴比妥緩沖液0.5ml即為50%標(biāo)準(zhǔn)溶血管。

[實(shí)驗(yàn)結(jié)果]

以50%溶血管為標(biāo)準(zhǔn),肉眼依次觀察,與標(biāo)準(zhǔn)管zui接近者為終點(diǎn)管。按下式計(jì)算1ml血清的補(bǔ)體單位。

血清中補(bǔ)體活性單位(CH 50 單位) = 1/血清總量×終點(diǎn)管稀釋倍數(shù)

本法測(cè)得血清總補(bǔ)體活性的正常值為80-160CH50μ/ml

[注意事項(xiàng)]

待測(cè)血清要求新鮮，一般要求在去血后 2小時(shí)做完實(shí)驗(yàn)。

試管口徑大小一致，清潔透明，便于觀察。

50%標(biāo)準(zhǔn)溶血管配置必須用同批實(shí)驗(yàn)用綿羊紅細(xì)胞，并同時(shí)方入冰箱。