對于絕大多數(shù)實驗室培養(yǎng)的用作模型的細胞來說，細胞傳代是一項*的工作，常用的傳代方法為：向長滿了細胞的培養(yǎng)瓶中加入足量胰酶浸泡消化細胞一段時間后再分散細胞并傳代。但是各種細胞對胰酶的敏感度千差萬別，有的細胞比如HEK293系列的極容易消化，而有些如RAW264.7幾乎不能被胰酶從瓶壁上消化下來。消化時間不夠，后續(xù)的細胞分散就需要用機械力，這樣對細胞損傷太大，而且往往達不到很好的效果；消化過度，則會引起某些敏感的細胞的死亡，對于廣大新手來說，在培養(yǎng)細胞時胰酶的消化程度很難把握。

方法改進：

1. 胰酶消化：細胞長滿后，棄培養(yǎng)基，用無菌PBS或者0.25%的胰酶溶液適量浸洗細胞一次，浸洗的目的是去除生活藏培養(yǎng)基中的血清等抑制胰酶活性的物質(zhì)，洗完后棄凈洗液，再次用0.25%的胰酶溶液潤洗一次，洗完后小心丟棄洗液，此時瓶內(nèi)還會殘留很少的胰酶溶液，蓋好細胞瓶塞，放入培養(yǎng)箱進行消化直到對光可見明顯的細胞間隙增大，瓶內(nèi)變圓細胞開始整體脫落，此時加入生長培養(yǎng)基終止消化，后續(xù)輕微用移液器吹打即可很好的分散細胞。

2. 有些實驗室采用添加EDTA的方法增加胰酶的消化能力，但是添加的EDTA會大量螯合體系中的二價離子，如Ca2+，如此會導(dǎo)致細胞尤為環(huán)境及胞內(nèi)離子的大量流失，容易對細胞照成更大的損傷。因此，本人改進的方法中不使用添加EDTA的胰酶消化液。

3. 對于本身貼壁不牢但是又容易聚集生長的細胞，典型的例子就是HEK293,方法可以改進為：采用上述殘液消化，但是在放入37度培養(yǎng)箱消化時培養(yǎng)瓶倒置，適當(dāng)延長消化時間（HEK293:5-8min）；因為無論是直接倒出還是用吸管吸，培養(yǎng)瓶內(nèi)殘留的胰酶還是很多，這類細胞極易從瓶壁上大塊脫落后，在胰酶溶液里面形成團狀，極難被消化分散。

4. 對RAW264.7這類極難用胰酶消化的細胞，可采用的改進方法如下：第二次用胰酶浸洗時延長時間至5-10min，之后倒出胰酶，剩余殘液繼續(xù)放回培養(yǎng)箱中進行消化10-15min，此時細胞可很容易的被吹打分散均勻。