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目前,血清仍是動物細胞培育中zui根本的的增加物,尤其是在原代培育或者細胞成長狀況不良時,常常會先使用有血清的培育液進行培育,待細胞成長旺盛今后,再換成無血清培育液。細胞轉(zhuǎn)入無血清培育基培育要有一個習慣過程,一般要逐漸降低血清濃度,從10%削減到5%,3%,1%,直至無血清培育。
降低過程中要留意觀察細胞形態(tài)是否發(fā)生改變,是否有部分細胞死亡,存活細胞是否還堅持原有的功能和生物學特性等。在實驗后這些細胞一般不再持續(xù)保留,很少有細胞能夠長期培育于無血清培育基而不發(fā)生改變的。細胞轉(zhuǎn)入無血清培育之前,要留有種子細胞,種子細胞按常規(guī)培育于含血清的培育基中,以保證細胞的特性不發(fā)生改變。
為了使細胞習慣無血清培育,關(guān)鍵的是使所培育細胞:
1.處于對數(shù)成長中期
2.>90%活細胞率
3.習慣時以較高的開始細胞接種
建議備份前一次混合培育的培育物,直到每一次細胞習慣了新的混合培育基。每一次削減血清前,可能需求在SFM/有血清混合培育基中進行幾回傳代。
在習慣過程中,不要讓細胞成長過度。這將增加挑選亞群的可能性。需求留意,與有血清培育基相比,大部分SFM包括十分少的蛋白質(zhì),因此更易于受外界因素的影響。
細胞習慣無血清培育基的方法
1.直接習慣——細胞從增加血清的培育基轉(zhuǎn)換到無血清培育基(SFM)中。
一些類型細胞可直接從包括血清的培育基習慣無血清培育基。關(guān)于直接習慣,接種細胞密度應該:2.5×105~3.5×105細胞/ml。當細胞密度到達1×106~3×106細胞/ml時,傳代培育細胞。當細胞密度在培育4到7天后到達2×106~4×106細胞/ml時,細胞*習慣了無血清培育基。每隔3~5天,當細胞密度到達1×106~3×106細胞/ml,細胞活率在90%時,貯備的習慣了無血清培育基的細胞培育物應該再次傳代培育。
2.接連習慣——分好幾步把細胞從增加血清的培育基轉(zhuǎn)換到無血清培育基(SFM)中,與直接習慣相比較,接連習慣趨向關(guān)于細胞愈加溫文一些。
(1)以2倍正常接種密度接種成長活躍的細胞培育物到75%有血清培育基:25%SFM混合培育基中,傳代培育。
(2)當細胞密度>5×105細胞/ml時,以2×105到3×105細胞/ml細胞密度,在有血清培育基:SFM為50∶50的混合培育基中傳代培育。
(3)以2×106到3×106細胞/ml細胞密度,25%有血清培育基和75%SFM中傳代培育。
(4)當細胞密度到達1×106到3×106細胞/ml(接種后4到6天),在100%SFM培育基中傳代培育。
(5)每隔3到5天,當細胞密度到達1×106到3×106細胞/ml,細胞活率在90%時,貯備的習慣了無血清培育基的細胞培育物應該再次傳代培育。
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