培養(yǎng)基可以是固體的培養(yǎng)基，也可以是液體培養(yǎng)基。實驗室中zui常用的是LB培養(yǎng)基。

實驗材料、試劑與主要儀器

（一） 實驗材料

大腸桿菌

（二） 試劑

1、胰蛋白胨

2、酵母提取物

3、氯化鈉

4、1mol/LNaOH

5、瓊脂粉

6、抗生素（氨芐青霉素、卡那霉素等）

（三）儀器

1、培養(yǎng)皿

2、帶帽試管

3、涂布器

4、滅菌鍋

5、無菌操作臺（含酒精燈、接種環(huán)、滅菌牙簽等）

6、恒溫搖床

四、操作步驟

（一）LB培養(yǎng)基的配制

配制每升培養(yǎng)基，應(yīng)在950m1去離子水中加入：

細菌培養(yǎng)用胰蛋白胨 10g

細菌培養(yǎng)用酵母提取物 5g

NaCl 10g

搖動容器直至溶質(zhì)*溶解，用1mol/L NaOH調(diào)節(jié)pH位至7.0。加入去離子水至總體積為lL，在15 lbf／in2 (1.034×105Pa)高壓下蒸氣滅菌20min，即為LB液體培養(yǎng)基。

LB固體培養(yǎng)基是在其液體培養(yǎng)基的基礎(chǔ)上另加瓊脂粉15g/L。

（二）細菌的培養(yǎng)

（１）在液體培養(yǎng)基中培養(yǎng)

1、過夜培養(yǎng)

⑴取5ml液體培養(yǎng)基加入一只無菌的試管中。

⑵用接種環(huán)或滅菌牙簽挑一個單菌落，接種于培養(yǎng)液中。

⑶蓋好試管，在搖床上以60r/min速度，于37℃過夜培養(yǎng)。

２、大體積培養(yǎng)

⑴按1∶100的比例將過夜培養(yǎng)物加入到一無菌燒瓶中，燒瓶的體積應(yīng)該是培養(yǎng)液體積的5倍以上。

⑵于37℃，約300r/min劇烈搖動培養(yǎng)。

（２）在固體培養(yǎng)基中培養(yǎng) 細菌在固體培養(yǎng)基上培養(yǎng)主要是為了獲得單菌落和短期保存。平板劃線法分離單菌落

⑴采用無菌技術(shù)，用接種環(huán)將接種物從平板的一側(cè)開始劃線。

⑵重新消毒接種環(huán)，從一劃線處將樣品劃線至平板的其余部分，重復(fù)劃線直至覆蓋整個平板。

⑶于37℃培養(yǎng)直至長出單菌落。