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ELISA試劑盒試驗中標準品的稀釋與加樣的操作過程

時間:2017/11/24閱讀:2390
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按著了解的鍵盤,想找您共享,此時的您在干嘛,有好東西,會想到跟我共享嗎?下面是上海紀寧為你們整理好的ELISA試劑盒試驗中標準品的稀釋與加樣的操作過程:

 

1.ELISA試劑盒在酶標包被板上設(shè)標準品孔10孔,在*、第二孔平分別加標準品100μl,然后在*、第二孔中加標準品稀釋液50μl,混勻;然后從*孔、第二孔中各取100μl分別加到第三孔和第四孔,再在第三、第四孔分別加標準品稀釋液50μl,ELISA試劑盒混勻;然后在第三孔和第四孔中先各取50μl棄掉,再各取50μl分別加到第五、第六孔中,再在第五、第六孔平分別加標準品稀釋液50ul,混勻;混勻后從第五、第六孔中各取50μl分別加到第七、第八孔中,再在第七、第八孔平分別加標準品稀釋液50μl,混勻后從第七、第八孔平分別取50μl加到第九、第十孔中,再在第九第十孔分別加標準品稀釋液50μl,混勻后從第九第十孔中各取50μl棄掉。(稀釋后各孔加樣量都為50μl,濃度分別為30ng/L,20ng/L ,10ng/L,5ng/L, 2.5ng/L)。

2. 加樣:分別設(shè)空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑,其他各步操作一樣)、待測樣品孔。在酶標包被板上待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,ELISA試劑盒然后再加待測樣品10μl(樣品畢竟稀釋度為5倍)。加樣將樣品加于酶標板孔底部,盡量不觸及孔壁,悄然晃動混勻。

3. 溫育:ELISA試劑盒用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。

4. 配液:將20倍濃縮洗刷液用蒸餾水20倍稀釋后備用。

5. 洗刷:當心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗刷液,靜置30秒后棄去,如此重復(fù)5次,拍干。

6. 加酶:每孔參與酶標試劑50μl,空白孔除外。

7. 溫育:操作同3。

8. 洗刷:操作同5。

9. 顯色:每孔先參與顯色劑A50μl,再參與顯色劑B50μl,悄然轟動混勻,37℃避光顯色15分鐘.

10.中止:每孔加中止液50μl,中止反應(yīng)(此時藍色立轉(zhuǎn))。

11. ELISA試劑盒測定:以空白空調(diào)零,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值)。 測定應(yīng)在加中止液后15分鐘以內(nèi)進行。

 

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