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夾心法ELISA實(shí)驗(yàn)結(jié)果定性判斷測(cè)定方法

時(shí)間:2017/9/27閱讀:1138
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定性測(cè)定的效果判別是對(duì)受檢標(biāo)本中是否含有待測(cè)抗原或抗體作出"有"或"無(wú)"的簡(jiǎn)略答復(fù),ELISA試劑盒分別用"陽(yáng)性"、"陰性"標(biāo)明。"陽(yáng)性"標(biāo)明該標(biāo)本在該測(cè)定系統(tǒng)中有反應(yīng)。"陰性"則為無(wú)反應(yīng)。用定性判別法也可得到半定量效果,即用滴度來(lái)標(biāo)明反應(yīng)的強(qiáng)度,其實(shí)質(zhì)仍是一個(gè)定性實(shí)驗(yàn)。在這種半定量測(cè)定中,將標(biāo)本作一系列稀釋后進(jìn)行實(shí)驗(yàn),呈陽(yáng)性反應(yīng)的稀釋度即為滴度。根據(jù)滴度的凹凸,可以判別標(biāo)本反應(yīng)性的強(qiáng)弱,這比查詢不稀釋標(biāo)本呈色的深淺判別為強(qiáng)陽(yáng)性、弱陽(yáng)性更具定量意義。
夾心法ELISA實(shí)驗(yàn)效果定性判別測(cè)定


a.陽(yáng)性判定值
陽(yáng)性判定值(cut-off value)一般為陰性對(duì)照A值加上一個(gè)特定的常數(shù),以此作為判別效果陽(yáng)性或陰性的標(biāo)準(zhǔn)。


陽(yáng)性判定值=NCX+0.05
標(biāo)本A值>陽(yáng)性判定值的為陽(yáng)性,小于陽(yáng)性判定值的為陰性。應(yīng)留心的是,式中0.05為該試劑盒的常數(shù),只適合于該特定條件下,而不是對(duì)各種試劑均可通用。


根據(jù)以上敘說(shuō)可以看出,ELISA試劑盒在這種方法中陰性對(duì)照和陽(yáng)性對(duì)照也起到實(shí)驗(yàn)的質(zhì)控效果,試劑蛻變和操作不當(dāng)均會(huì)發(fā)作"實(shí)驗(yàn)無(wú)效"的結(jié)果。


.標(biāo)本/陰性對(duì)照比值


 在實(shí)驗(yàn)條件(包括試劑)較難保證安穩(wěn)的情況下,這種判別法較為適宜。在得出標(biāo)本(S)和陰對(duì)  照(N)的A值后,核算S/N值。也有寫(xiě)作P/N的,這兒的P不代表陽(yáng)性(positive),而是患者(patient)的縮寫(xiě),不應(yīng)誤解。為防止混雜,更宜用S/N標(biāo)明。在前期的間接法ELISA中,有些作  者定出S/N為陽(yáng)性標(biāo)準(zhǔn),現(xiàn)多為各種測(cè)定所沿用。實(shí)際上每一測(cè)定系統(tǒng)應(yīng)該用實(shí)驗(yàn)求出各自的S/N  的閾值。更應(yīng)留心的是,N所代表的陰性對(duì)照是不含受檢物質(zhì)的人血清。

 

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