上?？婆d商貿(mào)有限公司主要經(jīng)營 ELISA試劑盒 、細胞、血清、抗體、生物試劑、培養(yǎng)基、一抗、二抗、等產(chǎn)品，產(chǎn)品國內(nèi)大部分地區(qū) ，銷售額逐年穩(wěn)步提高。上海科興商貿(mào)科技擁有雄厚的實力、合理的價格和優(yōu)良的服務(wù)，能夠及時解決和滿足客戶的各方面的需求。今天就來介紹ELISA試劑盒顯色的重要性
顯色是ELISA中的zui后一步溫育反應(yīng)，此時酶催化無色的底物生成有色的產(chǎn)物。反應(yīng)的溫度和時間仍是影響顯色的因素。在一定時間內(nèi)，陰性孔可保持無色，而陽性孔則隨時間的延長而呈色加強。適當提高溫度有助于加速顯色進行。在定量測定中，加入底物后的反應(yīng)溫度和時間應(yīng)按規(guī)定力求準確。定性測定的顯色可在室溫進行，時間一般不需要嚴格控制，有時可根據(jù)陽性對照孔和陰性對照孔的顯色情況適當縮短或延長反應(yīng)時間，及時判斷。
OPD底物顯色一般在室外溫或37℃反應(yīng)20-30分鐘后即不再加深，再延長反應(yīng)時間，可使本底值增高。OPD底物液受光照會自行變色，顯色反應(yīng)應(yīng)避光進行，顯色反應(yīng)結(jié)束時加入終止液終止反應(yīng)。OPD產(chǎn)物用酸終止后，顯色由橙黃色轉(zhuǎn)向棕黃色。
TMB受光照的影響不大，可在室溫中置于操作臺上，邊反應(yīng)觀察結(jié)果。但為保證實驗結(jié)果的穩(wěn)定性，宜在規(guī)定的適當時間閱讀結(jié)果。TMB經(jīng)HRP作用后，約40分鐘顯色達，隨即逐漸減弱，至2小時后即可*消退至無色。TMB的終止液有多種，疊氮鈉和SDS等酶抑制劑均可使反應(yīng)終止。這類終止劑尚能使藍色維持較長時間(12-24小時)不褪，是目視判斷的良好終止劑。此外，各類酸性終止液則會使藍色轉(zhuǎn)變成黃色，此時可用特定的波長(450nm)測讀吸光值。
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