支原體感染會(huì)在你不經(jīng)意時(shí)令培養(yǎng)細(xì)胞慢慢枯萎，因此對(duì)培養(yǎng)細(xì)胞定期進(jìn)行支原體檢測(cè)非常重要。支原體感染不易察覺(jué)，只有在其擴(kuò)散前找出被污染的培養(yǎng)物，才能及時(shí)避免更大的損失。上?？婆d就為你介紹了幾種細(xì)胞培養(yǎng)中檢測(cè)支原體的常用方法。
分離培養(yǎng)法生物通
分離培養(yǎng)法是支原體檢測(cè)的金標(biāo)方法，其檢測(cè)度zui高。這種方法是從可疑的細(xì)胞培養(yǎng)體系中取樣，并接種到zui適宜支原體生長(zhǎng)的瓊脂平板上。如果樣本中含有支原體，它們就會(huì)在這種瓊脂平板上*生長(zhǎng)，zui終形成明顯可見(jiàn)的特征性菌落。分離培養(yǎng)法基本不會(huì)出現(xiàn)假陰性結(jié)果，因此被譽(yù)為支原體檢測(cè)金標(biāo)準(zhǔn)。不過(guò)分離培養(yǎng)法也存在兩個(gè)弊端，一是檢測(cè)時(shí)間太長(zhǎng)，支原體要長(zhǎng)出明顯克隆至少需要4周時(shí)間。二是盡管可以檢測(cè)絕大多數(shù)支原體種類(lèi)，分離培養(yǎng)法也有力所不及的時(shí)候。
如果你實(shí)在不想等這么久，或者希望在分離培養(yǎng)法的等待過(guò)程中先拿到初步結(jié)果，你可以試一試DNA、PCR或酶學(xué)檢測(cè)方法。不過(guò)需要注意的是，上述檢測(cè)方法都不能單獨(dú)檢出所有類(lèi)型的支原體，而且靈敏度也沒(méi)有分離培養(yǎng)法高，所以結(jié)合使用兩種方法以獲得zui可靠的檢測(cè)結(jié)果。
DNA檢測(cè)
DNA檢測(cè)需要將可疑樣品與指示細(xì)胞共同培養(yǎng)，因此一般需要幾天時(shí)間。DNA檢測(cè)所用的指示細(xì)胞通常是細(xì)胞質(zhì)區(qū)域較大的Vero細(xì)胞，如果原樣本中含有支原體，那么當(dāng)細(xì)胞DNA被熒光染料（如Hoechst染料）染色時(shí)，就可以在指示細(xì)胞的核周?chē)^察到熒光斑點(diǎn)或熒光顆粒。分離培養(yǎng)法用來(lái)檢測(cè)支原體M. hyorhinis菌株并不可靠，而DNA法可以準(zhǔn)確的將其檢測(cè)出來(lái)。
PCR法
PCR法也可以檢測(cè)M. hyorhinis菌株，PCR法檢測(cè)支原體只需幾個(gè)小時(shí)，是zui快但也是zui不靈敏的支原體檢測(cè)方法。該方法采用針對(duì)支原體DNA的引物用PCR檢測(cè)可疑樣本，其中PCR引物通常針對(duì)支原體的16S rRNA基因。在凝膠電泳過(guò)程中，支原體DNA會(huì)顯示為特異性條帶，以此指示支原體的存在。PCR法可以檢測(cè)大多數(shù)支原體，但謹(jǐn)慎起見(jiàn)同時(shí)使用另一種檢測(cè)方法來(lái)進(jìn)行驗(yàn)證。酶學(xué)檢測(cè)和ELISA
此外，也還存在一些其他支原體檢測(cè)方法。例如酶學(xué)檢測(cè)是將可疑樣本添加到特定底物中，在這一體系內(nèi)支原體的酶可以將ADP轉(zhuǎn)化為ATP，隨后能利用ATP發(fā)光的luciferase酶就可以指示支原體的存在。ELISA也能用于支原體檢測(cè)，以ELISA法為基礎(chǔ)的支原體檢測(cè)一般使用針對(duì)支原體16S rRNA基因的帶標(biāo)記探針或抗體，來(lái)檢測(cè)培養(yǎng)物中是否含有支原體。
定期檢測(cè)
支原體感染會(huì)使培養(yǎng)細(xì)胞慢慢枯萎，因此對(duì)培養(yǎng)細(xì)胞定期進(jìn)行支原體檢測(cè)非常重要。一般來(lái)說(shuō)每1至3個(gè)月就應(yīng)該進(jìn)行一次支原體檢測(cè)。將定期支原體檢測(cè)常規(guī)化堅(jiān)持下去，是細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)室應(yīng)對(duì)支原體感染的關(guān)鍵。
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