（一）材料與方法：
（1）生化鑒定：對(duì)SS平板與普通葡萄糖培養(yǎng)基生長的可疑菌落進(jìn)行純培養(yǎng)，然后接種在肝肉湯中培養(yǎng)，置37℃條件下24h后接種于腸桿菌科細(xì)菌生化常規(guī)微量鑒定管作生化鑒定。大腸桿菌科細(xì)菌生化常規(guī)微量鑒定管由浙江省*后勤部衛(wèi)生防疫檢驗(yàn)所提供。
（2）分離菌的致病性試驗(yàn)：將分離菌培養(yǎng)24h后接種3只小白鼠每只腹腔注射0．3ml，另設(shè)僅接種肉湯的1只小白鼠作對(duì)照，并對(duì)死亡小白鼠作第2代接種培養(yǎng)，觀察3d。小白鼠由云南生物制藥廠提供，每只體重16～20g。
（3）分離菌的藥敏試驗(yàn)：采用藥敏試紙擴(kuò)散法，即將分離菌的純培養(yǎng)物分別涂抹在SS平板上，靜置5min后貼上藥敏試紙片。置3712培養(yǎng)反應(yīng)24h，測量藥敏試紙片抑菌圈的直徑并判定其敏感性。藥敏試紙均為浙江省杭州無和微生物試劑有限公司生產(chǎn)。
（5）將該菌接種在SS平板上生長，ss平板有2種菌落，其中較明顯的一種菌落呈深紅色（1號(hào)菌落）經(jīng)涂片鏡檢可見大量兩端鈍圓、單獨(dú)散在的革蘭氏陰性桿菌，長約2～3ptm，寬為0．6μm左右；另一種菌落呈黃紅色（2號(hào)菌落）有相互融合，直徑2-3mm，用鉑金耳挑起菌落則呈長絲狀，經(jīng)涂片染色鏡檢，可見革蘭氏陰性成雙或散在排列大小為0．8～2．01mm×O．3-0．5mm的菌體，取第二代藍(lán)頭死亡小白鼠的心血接種于肉湯中培養(yǎng)24h后，將其接種于普通葡萄糖培養(yǎng)基上生長，結(jié)果有兩種菌落，1號(hào)菌落呈黃色，2號(hào)菌落呈乳白色。病原菌的分離：小白鼠（藍(lán)頭）接種增菌培養(yǎng)物6h后死亡，其余2只及對(duì)照組小白鼠3d后健活。取死亡小白鼠心血涂片，染色鏡檢，可見2種大小不一兩端鈍圓著色較深革蘭氏陰性桿菌。同時(shí)將其接種于伊紅美藍(lán)瓊脂板上也有兩種菌落，1號(hào)產(chǎn)生紫黑色金屬光澤，2號(hào)以接種環(huán)挑之易成長絲狀。
（二）結(jié)果：
（1） 病原菌的分離：小白鼠（藍(lán)頭）接種增菌培養(yǎng)物6h后死亡，其余2只及對(duì)照組小白鼠3d后健活。取死亡小白鼠心血涂片，染色鏡檢，可見2種大小不一兩端鈍圓著色較深革蘭氏陰性桿菌。將該菌接種在SS平板上生長，ss平板有2種菌落，其中較明顯的一種菌落呈深紅色（1號(hào)菌落）經(jīng)涂片鏡檢可見大量兩端鈍圓、單獨(dú)散在的革蘭氏陰性桿菌，長約2～3ptm，寬為0．6μm左右；另一種菌落呈黃紅色（2號(hào)菌落）有相互融合，直徑2-3mm，用鉑金耳挑起菌落則呈長絲狀，經(jīng)涂片染色鏡檢，可見革蘭氏陰性成雙或散在排列大小為0．8～2．01mm×O．3-0．5mm的菌體，取第二代藍(lán)頭死亡小白鼠的心血接種于肉湯中培養(yǎng)24h后，將其接種于普通葡萄糖培養(yǎng)基上生長，結(jié)果有兩種菌落，1號(hào)菌落呈黃色，2號(hào)菌落呈乳白色。同時(shí)將其接種于伊紅美藍(lán)瓊脂板上也有兩種菌落，1號(hào)產(chǎn)生紫黑色金屬光澤，2號(hào)以接種環(huán)挑之易成長絲狀。
（2）藥敏試驗(yàn)：1號(hào)菌對(duì)*敏感，對(duì)*和*不敏感。2號(hào)菌對(duì)*、*、*高度敏感，對(duì)*中度敏感，對(duì)*、*鈉不敏感。
（3）致病力試驗(yàn)：藍(lán)頭小白鼠*代接種6h后死亡，其余2只及對(duì)照小白鼠3d后仍健活。藍(lán)頭小白鼠第二代接種6h左右又死亡。取死亡小白鼠心血涂片、染色鏡檢及分別培養(yǎng)，又分離出與l、2號(hào)菌株生物特性相同的細(xì)菌。2號(hào)菌株比l號(hào)菌株對(duì)小白鼠致病力強(qiáng)。
（4）通過對(duì)大腸桿菌菌株的血清分型試驗(yàn)表明，只有致病性大腸桿菌044：K74（L）為陽性，其余均為陰性。
（三）探討：
（1） 大腸桿菌的特點(diǎn)是易形成抗藥性，藥敏試驗(yàn)結(jié)果可以看出曾對(duì)大腸桿菌比較敏感的*、*等隨著不斷的應(yīng)用均產(chǎn)生了不同程度的抗藥性。所以在使用藥物治療大腸桿菌時(shí)有條件的應(yīng)根據(jù)藥敏試驗(yàn)結(jié)果選擇敏感藥物，且注意交替用藥
（2）根據(jù)試驗(yàn)結(jié)果，生化反應(yīng)對(duì)鑒定為大腸桿菌與肺炎克雷伯氏菌有一定臨床意義。與浙江省*后勤部衛(wèi)生防疫檢驗(yàn)的一致。臨床運(yùn)用藥物治療及預(yù)防進(jìn)一步證明本傳染病是由肺炎可雷伯氏菌及大腸桿菌混合感染而引起。
（3） 由致病性大腸桿菌與肺炎克雷伯氏菌同時(shí)混合感染發(fā)病的豬傳染病尚不太常見，肺炎克雷伯氏菌為條件性病原菌，可能由于氣候的原因，導(dǎo)致豬的抵抗力的下降而致??；豬大腸桿菌病較常見，但多為散發(fā)；這次急性病例的暴發(fā)可能與氣候因素及兩種致病菌同時(shí)感染相關(guān)。
（4）根據(jù)分離菌的染色特性、形態(tài)、大小及藥敏試驗(yàn)、毒性試驗(yàn)、生化反應(yīng)的鑒定結(jié)果，分離菌為致病性大腸桿菌和肺炎克雷伯氏菌。
（5）在培養(yǎng)病料過程中，我們作了肺的需氧和厭氧環(huán)境培養(yǎng)，肝也作了需氧和厭氧培養(yǎng)，而接種小白鼠發(fā)現(xiàn)只有肺的需氧培養(yǎng)液能使小白鼠死亡，而其它不能。說明已鑒定出的兩種菌落在本次試驗(yàn)中表現(xiàn)為需氧型。
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（4）病原菌的分離：肉眼觀察病料情況，心臟有少量充血點(diǎn)，肺臟有灰白色病灶，肝臟有充血點(diǎn)并質(zhì)地較脆。用燒烙板燒烙后無菌采集病料分別接種于肝肉湯中，置37℃增菌培養(yǎng)24h。取培養(yǎng)液腹腔接種小白鼠3只，每只O．3ml，并作標(biāo)記紅頭、藍(lán)頭和黑頭，同時(shí)用肝肉湯接種小白鼠1只作對(duì)照，觀察3d。剖解死亡小白鼠無菌取心血分別接種于肝肉湯和 SS培養(yǎng)基、伊紅美藍(lán)培養(yǎng)基、普通葡萄糖培養(yǎng)基，37*（2培養(yǎng)24h。取培養(yǎng)液作第二代接種小白鼠3只，每只腹腔注射 O．3ml，同上述方法對(duì)死亡小白鼠進(jìn)行解剖，無菌取心血涂片染色鏡檢，觀察細(xì)菌的形態(tài)
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