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單克隆抗體的產(chǎn)生方法

閱讀：478發(fā)布時(shí)間：2016-6-16

　　經(jīng)過(guò)反復(fù)克隆化獲得的抗體陽(yáng)性雜交瘤細(xì)胞株應(yīng)立即擴(kuò)大培養(yǎng)(除及時(shí)凍存的細(xì)胞外)。因多次傳代易引起染色體逐漸丟失而使細(xì)胞產(chǎn)生抗體能力逐漸減弱甚至消失，還應(yīng)盡早使用獲得的抗體陽(yáng)性雜交瘤細(xì)胞株制備單克隆抗體。
　　
　　大量制備單克隆抗體的方法有兩類(lèi)，一類(lèi)是動(dòng)物體內(nèi)誘生法，另一類(lèi)是體外培養(yǎng)法
　　
　?。ㄒ唬╊?lèi)是動(dòng)物體內(nèi)誘生法
　　
　　接種動(dòng)物常選用BALB／c小鼠或與BALB／c小鼠雜交的Fl代小鼠。接種前l(fā)周左右，于小鼠腹腔內(nèi)注入降植烷或醫(yī)用液狀石蠟0．5ml。每次小鼠腹腔注射0．5X106一1X106個(gè)雜交瘤細(xì)胞。接種后7—10天，小鼠腹部逐漸長(zhǎng)大，誘生出腹腔腫瘤并產(chǎn)生含單克隆抗體的腹腔積液。接種后10一14天，可分次采集腹腔積液，1只可得10～20ml(5～20mg／m1)。收集到的腹腔積液，離心去除細(xì)胞，滅活(56℃30min)，再次離心，取上清液，加入0．1％疊氮鈉，分裝保存于-20℃。如凍干保存，抗體效價(jià)可保持更久。
　　
　　(二)體外培養(yǎng)法
　　
　　將雜交瘤細(xì)胞接種到培養(yǎng)瓶中，在5％C02，37℃孵箱中培養(yǎng)數(shù)天后，收集上清液，離心去除細(xì)胞和碎片。本法所得抗體含量不高，為5—25pg／m1。但仍可滿(mǎn)足部分實(shí)驗(yàn)的要求。另一種是雜交瘤細(xì)胞高密度培養(yǎng)，分兩種類(lèi)型：一類(lèi)是懸浮培養(yǎng)系統(tǒng)，即采用轉(zhuǎn)瓶或發(fā)酵罐式的生物反應(yīng)器；另一類(lèi)是細(xì)胞固定化培養(yǎng)系統(tǒng)，包括中空纖維細(xì)胞培養(yǎng)系統(tǒng)和微囊化細(xì)胞培養(yǎng)系統(tǒng)。高密度培養(yǎng)可使單位體積單克隆抗體含量明顯增加，產(chǎn)量可達(dá)lg／L。

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