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組織樣本做ELISA時(shí)實(shí)驗(yàn)如何減少實(shí)驗(yàn)誤差

閱讀：449發(fā)布時(shí)間：2015-10-15

    經(jīng)常會(huì)有來(lái)自學(xué)?？蛻?hù)咨詢(xún)：用動(dòng)物組織樣本做ELISA時(shí)實(shí)驗(yàn)，如何確定排除檢測(cè)誤差?它與western blot定量哪個(gè)實(shí)驗(yàn)結(jié)果更可靠？

我公司技術(shù)人員解析到：

一、定量檢測(cè)的話肯定是選ELISA。 Western blot只是一個(gè)半定量的實(shí)驗(yàn)方法。

二、關(guān)于排除檢測(cè)誤差：1）實(shí)驗(yàn)人員一定要選好合適的內(nèi)參，比如可以測(cè)目標(biāo)蛋白/總蛋白，則內(nèi)參是總蛋白量，如果使用目標(biāo)蛋白/總組織重量，則很不準(zhǔn)確，因?yàn)槌樘徇^(guò)程的效率不穩(wěn)定，即每克組織能夠提取出來(lái)的蛋白量不固定，而且每個(gè)組織含水/含不相干的組織量也不同。建議可以參考相關(guān)文獻(xiàn)來(lái)選擇內(nèi)參。2）zui普通的查驗(yàn)誤差的辦法，每個(gè)試樣多測(cè)幾個(gè)孔。一般至少兩個(gè)，三個(gè)更好。確定每個(gè)孔讀數(shù)一致或非常相近，則知道結(jié)果比較可信。

組織樣本的處理原則：

1，稱(chēng)取的組織重量不能低于50mg。

2，組織在勻漿器勻漿過(guò)程中，勻漿液應(yīng)該分2次加進(jìn)去，這樣勻漿更充分。

3，充分勻漿完成后離心取上清，離心機(jī)的轉(zhuǎn)數(shù)選取2000-3000轉(zhuǎn)每分，轉(zhuǎn)數(shù)不宜超過(guò)5000.離心時(shí)間為15-30分鐘。

4，勻漿的比例按照10%，即1g組織加9ml的勻漿液，勻漿液一般選取PBS（PH=7.2-7.4） 


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