1.如何選用特殊細胞系培養(yǎng)基？ |
培養(yǎng)某一類型細胞沒有固定的培養(yǎng)條件。在MEM中培養(yǎng)的細胞，很可能在DMEM或M199中同樣很容易生長?？傊?，MEM做粘附細胞培養(yǎng)、RPMI-1640做懸浮細胞培養(yǎng)是一個好的開始，各種目的無血清培養(yǎng)AIM V（12005）培養(yǎng)基（SFM）。
|
2.L-*在細胞培養(yǎng)中重要嗎？它在溶液中不穩(wěn)定嗎？
|
L-*在細胞培養(yǎng)時是重要的。脫掉氨基后，L-*可作為培養(yǎng)細胞的能量來源、參與蛋白質的合成和核酸代謝。L-*在溶液中經過一段時間后會降解，但是確切的降解率一直沒有zui終定論。L-*的降解導致氨的形成，而氨對于一些細胞具有毒性。
|
3.GlutaMAX-I是什么？培養(yǎng)細胞如何利用GlutaMAX-I？這個二肽有多穩(wěn)定？
|
GlutaMAX-I 二肽是一個L-*的衍生物，其不穩(wěn)定的alpha-氨基用L-*來保護。一種肽酶逐漸裂解二肽，釋放L-*供利用。
|
GlutaMAX-I二肽非常穩(wěn)定，即使在121磅滅菌20分鐘，GlutaMAX-I 二肽溶液有zui小的降解，如果在相同條件下，L-*幾乎*降解。
|
4.什么培養(yǎng)基中可以省去加酚紅？
|
酚紅在培養(yǎng)基中被用來作為PH值的指示劑：中性時為紅色，酸性時為黃色，堿性時為紫色。研究表明，酚紅可以模擬固醇類激素的作用，（特別是雌激素）。為避免固醇類反應，培養(yǎng)細胞，尤其是哺乳類細胞時，用不加酚紅的培養(yǎng)基。由于酚紅干擾檢測，一些研究人員在做流式細胞檢測時，不使用加有酚紅的培養(yǎng)基。
|
酚紅在培養(yǎng)基中被用來作為PH值的指示劑：中性時為紅色，酸性時為黃色，堿性時為紫色。研究表明，酚紅可以模擬固醇類激素的作用，（特別是雌激素）。為避免固醇類反應，培養(yǎng)細胞，尤其是哺乳類細胞時，用不加酚紅的培養(yǎng)基。由于酚紅干擾檢測，一些研究人員在做流式細胞檢測時，不使用加有酚紅的培養(yǎng)基。
|
5.如何用臺盼蘭計數(shù)活細胞？
|
用無血清培養(yǎng)基把細胞懸液稀釋到200～2000個/毫升，在0.1毫升的細胞懸液中加入0.1毫升的0.4％的臺盼蘭溶液。輕輕混勻，數(shù)分鐘后，用血球計數(shù)板計數(shù)細胞?；罴毎懦馀_盼蘭，因而染成藍色的細胞是死細胞。
|
6.如何消除組織培養(yǎng)的污染？
|
當重要的培養(yǎng)污染時，研究者可能試圖消除或控制污染。首先，確定污染物是細菌、真菌、支原體或酵母，把污染細胞與其它細胞系隔離開，用實驗室消毒劑消毒培養(yǎng)器皿和超凈臺，檢查HEPA過濾器。
|
高濃度的抗生素和抗霉菌素可能對一些細胞系有毒性，因而，做劑量反應實驗確定抗生素和抗霉菌素產生毒性的劑量水平。這點在使用抗生素如兩性霉素B和抗霉菌素如泰樂菌素時尤其重要。
