mosquito® LCP為一個(gè)富有挑戰(zhàn)性的手動(dòng)過(guò)程提供了高通量、高準(zhǔn)確性和無(wú)以倫比的重復(fù)性。它固有的靈活性使結(jié)晶學(xué)中其他氣相擴(kuò)散方法得以開(kāi)展，為科學(xué)家們帶來(lái)了廣泛的選擇，可滿足任一具體項(xiàng)目。它的、可靠和易用讓更多的科學(xué)家有機(jī)會(huì)使用到這種新穎的膜蛋白結(jié)晶技術(shù)。
完整的膜蛋白如G蛋白偶聯(lián)受體（GPCR）和離子通道，是參與細(xì)胞信號(hào)通路、細(xì)胞穩(wěn)態(tài)和人類疾病的關(guān)鍵分子;大約三分之一已批準(zhǔn)的藥物靶定了這些蛋白。因此，獲得膜蛋白的高分辨率結(jié)構(gòu)信息，以便與分子和細(xì)胞數(shù)據(jù)互補(bǔ)，對(duì)科學(xué)界和藥物開(kāi)發(fā)行業(yè)相當(dāng)重要。
*，膜蛋白很難純化和結(jié)晶，因?yàn)樗鼈冊(cè)谔烊恢p層之外的環(huán)境中不穩(wěn)定，容易沉淀。正因?yàn)槿绱?，使用水溶液的結(jié)晶學(xué)傳統(tǒng)方法不適合它們的重新溶解。在1996年，科研人員開(kāi)發(fā)出一種in meso脂立方相（LCP）技術(shù)，實(shí)現(xiàn)了細(xì)菌視紫紅質(zhì)的結(jié)晶1，從那以后也*改變了膜蛋白的結(jié)晶過(guò)程。這種方法為膜蛋白的成核和生長(zhǎng)提供了一個(gè)框架，從而促進(jìn)了結(jié)晶。
LCP結(jié)晶是通過(guò)兩個(gè)步驟開(kāi)展的。首先，蛋白與脂類混合，自發(fā)形成脂立方相，產(chǎn)生了果凍狀的高粘稠物質(zhì)。為了加強(qiáng)結(jié)晶，還添加了添加劑和沉淀物，取決于不同條件，結(jié)晶一般在數(shù)日或數(shù)周出現(xiàn)。
結(jié)晶試驗(yàn)通常包括在樣品上試驗(yàn)的大量條件。的結(jié)晶試驗(yàn)不僅需要盡可能降低樣品體積，以確保寶貴蛋白的zui大限度利用，還需要自動(dòng)化開(kāi)展，以便減少艱苦的體力勞動(dòng)并加速平板制備過(guò)程。自動(dòng)化減少了手動(dòng)移液的誤差，并確保了樣品均一性。
脂類/蛋白相的混合和處理
蛋白和脂類的混合問(wèn)題是由Martin Caffrey成功解決的，這位科學(xué)家目前在都柏林的圣三一學(xué)院，他開(kāi)發(fā)出一種方法來(lái)連接兩個(gè)注射器，一個(gè)含有脂類，而另一個(gè)含有蛋白，這兩個(gè)注射器由體積連接器相連。注射器之間蛋白和脂類的來(lái)回反復(fù)混合使得脂立方中間相形成2。
mosquito® LCP移液設(shè)備旨在將LCP材料和篩選緩沖液的納升級(jí)分液過(guò)程自動(dòng)化。它是通過(guò)TTP LabTech、Gebhard Schertler和Pat Edwards之間的合作項(xiàng)目而開(kāi)發(fā)的。
通過(guò)一個(gè)可選的LCP混合器，mosquito® LCP為in meso（LCP）技術(shù)提供了一個(gè)全自動(dòng)的方案，從而顯著提高了設(shè)置篩選平板的速度。準(zhǔn)確分配納升級(jí)LCP溶液的能力，其體積比手動(dòng)方法要小得多，節(jié)省了寶貴的樣品，實(shí)現(xiàn)了更多篩選條件的評(píng)估。
LCP分液準(zhǔn)確性和重復(fù)性
mosquito® LCP的可靠性是基于其注射器分液臂和mosquito移液器吸頭準(zhǔn)確分配LCP液滴和篩選溶液的能力，確保了液滴體積和位置的一致，從而避免了手動(dòng)誤差。
mosquito® LCP融合了已被廣泛接受的mosquito® Crystal的特征和功能，將mosquito移液頭與微注射器分液器相結(jié)合，能將25-2000 nl的LCP材料準(zhǔn)確分配至載玻片或市售的平板上。mosquito® LCP與所有SBS形式的平板兼容，包括zui近由Schertler小組和SWISSCI開(kāi)發(fā)的LCP平板，它能實(shí)現(xiàn)晶體的成像。
mosquito® LCP分配體積的分析證明了它的高準(zhǔn)確性，對(duì)于低至25 nl的體積，誤差小于10%。，對(duì)于所有檢測(cè)的體積，液滴體積的變異系數(shù)（CV）百分比小于10%，且隨體積增加而逐漸降低。
目前與LCP方法相關(guān)的多個(gè)技術(shù)問(wèn)題為此過(guò)程的自動(dòng)化帶來(lái)了挑戰(zhàn)。然而，主要問(wèn)題在于很難準(zhǔn)確處理小體積且極為粘稠的立方相材料，直到zui近，這一問(wèn)題才成功解決。
會(huì)員1.png)